采用STORM-显微技术揭示端粒T-loop构象形成.pptVIP

Super-resolution fluorescence imaging of telomeres reveals TRF2-Dependent T-loop Formation 采用STORM 显微技术揭示端粒T-loop构象形成机制 11生技三组 STORM 显微技术 STORM 显微技术是在各种颜色的光照下使用的，驱动为荧光态和暗态的发光分子团，从而得到了比传统光学显微镜高 10 倍以上分辨率的显微技术。 超高分辨率荧光成像：把荧光团连接到一个可以设计成依次连接许多种生物分子的抗体上，然后把连接了荧光团的生物样本曝露在变波长的连续闪光下，分别激发不同子集的荧光团。把这些不同子集的荧光团发光的图像合成一张能够清晰分辨荧光团的图像 。 背景 出现端粒概念，1938、1941. 线性质粒DNA末端引进细胞中与染色体DNA结合，1981. 双链损伤DSB启动信号来阻止细胞周期过程，2007. 端粒具有抑制不当DSB修复和DNA损伤的能力，即端粒具有保护DNA功能，2010. shelterin 蛋白 哺乳动物细胞的shelterin 蛋白可以解决DNA末端的保护问题。 人端粒正常功能的维持是在复杂的端粒蛋白网络的调控下完成的。其核心部分就是保卫蛋白复合体（shelterin），它包括 TRF1、 TRF2 、RAP1、TIN2、TPP1 和 POT1六种端粒蛋白。它们相互作用或与其它端粒蛋白联合作用，直接或间接地影响端粒的长度、结构和功能 。 T-loop 端粒的末端并不是线性的，而是一个环状结构（T-loop）。 端粒的shelterin 蛋白促使并保持这个结构的形成，这一环状结构能够保护染色体的完整性和稳定性，阻止末端的相互融合和核酸酶的降解。 验证t-loop 的形成或维护需要TRF2的实验 t-loop 的形成或维护需要TRF2的机理 t-loop 的形成或维护需要端粒重复序列结合因子2（TRF2）。 在 shelterin 蛋白复合物中，TRF2 能独一无二的通过两个途径保护端粒：一个是经典的非同源末端连接（ NHEJ），另外一个是 ATM 依赖性 DNA 损伤信号途径。研究指出 TRF2 依赖性端粒重塑形成 t-loop 构象，会导致染色体末端封闭，这就解释了为什么 NHEJ 和 ATM 信号通路，在存在 TRF2 蛋白的时候会受到抑制。 T-环与TRF2的关系 TRF2的功能 TRF2可以改造人工端粒成环状结构的DNA底物，这表明在体外TRF2有能力生成的T循环 TRF2也促进了超螺旋端粒DNA和诱导钢绞线体外侵入。 TRF2可以促进循环的T形成通过中介链入侵端粒末端和稳定得到的HJ状结构。 TRF2可以绑定保护霍利迪路口（ HJ ）在体外。 TRF2删除将减少在染色体末端的T环路或消除。检测体内吨循环的T环频率和量化考核。 * 端粒如何保护DNA末端？ 从实验中可以看出：无论缺失的是 TRF1，Rap1 或 POT1 蛋白（POT1a 和 POT1b）中任何一个，都不会对t-loop的形成造成影响。 结论： t-loop 的形成或维护需要端粒重复序列结合因子。 *