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第六章 色谱分析法导论 色谱法或色谱分析法，是一种分离分析技术，它利用混合物中各物质在两相间分配系数的差别，当溶质在两相间作相对移动时，各物质在两相间进行多次分配，从而使各组分得到分离。可完成这种分离的仪器称为色谱仪。 第一节 色谱及分类 茨维特实验 一、色谱法 色谱法是一种分离分析技术。它是利用各物质在两相中具有不同的分配系数，当两相作相对运动时，这些物质在两相中进行多次反复的分配来达到分离的目的 。 色谱法以其具有高分离效能、高检测性能、分析时间快速而成为现代仪器分析方法中应用最广泛的一种方法。 二、色谱法分类 2．按固定相的固定方式 分离过程 当流动相中携带的混合物流经固定相时，其与固定相发生相互作用。由于混合物中各组分在性质和结构上的差异，与固定相之间产生的作用力的大小、强弱不同，随着流动相的移动，混合物在两相间经过反复多次的分配平衡，使得各组分被固定相保留的时间不同，从而按一定次序由固定相中流出。 第二节 色谱流出曲线和术语 一、 色谱流出线 从进样到被测组分流出色谱柱进入检测器连续测定，得到的检测信号随时间变化的曲线称为色谱流出曲线或色谱图。 二、色谱术语 1．基线：操作条件稳定后，无样品通过时检测器所反映的信号一时间曲线。 它反映检测器系统噪声随时间变化。稳定的基线是一条直线。 2．色谱峰：从被测组分开始进入检测器至完全流出检测器所形成的峰型部分称色谱峰。基线与色谱峰组成了一个完整的色谱图。 3．保留值 死时间tM：不与固定相作用的物质从进样到出现峰极大值时的时间。 保留时间tR：试样从进样到出现峰极大值时的时间。它包括组份随流动相通过柱子的时间 tM和组份在固定相中滞留的时间。 调整保留时间 ：某组份的保留时间扣除死时间后的保留时间，它是组份在固定相中的滞留时间。 色谱流出曲线的意义 色谱峰数=样品中单组份的最少个数； 色谱保留值——定性依据； 色谱峰高或面积——定量依据； 色谱保留值或区域宽度——色谱柱分离效能评价指标； 色谱峰间距——固定相或流动相选择是否合适的依据。 第三节 色谱分析基本理论 两组份峰间距足够远： 由各组份在两相间的分配系数决定，即由色谱过程的热力学性质决定。 一、塔板理论 塔板模型：将一根色谱柱视为一个精馏塔，即色谱柱是由一系列连续的、相等的水平塔板组成。每一块塔板的高度用H表示，称为塔板高度。 二、速率理论 速率方程（也称范.弟姆特方程式） 1．涡流扩散项 A = 2λdp dp：固定相的平均颗粒直径 λ：固定相的填充不均匀因子 2．分子纵向扩散项 B = 2νDg ν ：弯曲因子，填充柱色谱，ν1。 Dg：组分分子在气相中的扩散系数（cm2·s-1） 3．传质阻力项 三、分离度 1．色谱柱的总分离效能 2.分离度(R)的表达式 R值越大，表明两组分的分离程度越高; R=1.0时，分离程度可达98％; R1.0时两峰有部分重叠; R=1.5时，分离程度达到99.7％; 所以，通常用R=1.5作为相邻两色谱峰完全分离的指标。 第四节 定性和定量分析 色谱法是分离复杂混合物的重要方法,同时还能将分离后的物质直接进行定性和定量分析。 一、定性分析 二、定量分析 1．响应信号的测量 峰高：峰顶与基线之间的距离，测量比较简单，特别适于较窄的色谱峰 峰面积： （1）自动测量：色谱工作站。 （2）手工法测量： 3. 定量方法 分类： （1）外标法 （2）内标法 （3）归一化法 （1）外标法 把待测组分的纯物质配成不同浓度的标准系列； 在一定操作条件下分别向色谱柱中注入相同体积的标准样品，测得各峰的峰面积或峰高，绘制A—c或h-c的标准曲线； 在完全相同的条件下注入相同体积的待测样品，根据所得的峰面积或峰高从曲线上查得含量。 外标法不使用校正因子，准确性较高； 操作条件变化对结果准确性影响较大； 对进样量的准确性控制要求较高； 适用于日常控制分子或大量同类量试样的快速分析。 （2）内标法 应用前提：当只需测定试样中某几个组分，或试样中所有组分不可能全部出峰时，可采用内标法； 准确称取试样，加入一定量某种纯物质作为内标物，然后进行色谱分析; 由被测物和内标物在色谱图上相应的峰面积(或峰高)和相对校正因子，求出某组分的含量。 内标物要满足以下要求： 试样中不含有内标物质； 与被测组分性质比较接近； 不与试样发生化学反应； 出峰位置应位于被测组分附近，且无组分峰影响 （3）归一化法 将试样中所有组分的含量之和按100％计算，以它们相应的色谱峰面积或峰高为定量参数，通过下列公式计算各组分的质量分数： 特点及要求：