茉莉花香气相关基因JsDXS及其启动子的克隆与表达分析教案.docVIP

园 艺 学 报 2014，41（6）：1236–1244 http: // www. ahs. ac. cn Acta Horticulturae Sinica E-mail: yuanyixuebao@126.com 收稿日期：2013–12–13；修回日期：2014–04–10 基金项目：福建省科技厅区域重大项目（2010N3001）；福建农林大学园艺植物种质与高优生产技术创新团队项目（cxtd12013） * 通信作者 Author for correspondence（E-mail：ynxtea@126.com，guixinchen@126.com；Tel：0591 茉莉花香气相关基因JsDXS及其启动子的克隆 与表达分析 孙 君1，陈桂信1,*，叶乃兴1,2,*，吕恃衡1，刘志钦3，黄 玮1，林志达1 （1福建农林大学园艺学院，福州 350002；2福建农林大学茶叶科技与经济研究所，福州 350002；3福建农林大学生 命科学学院，福州 350002） 摘 要：以双瓣茉莉花瓣为材料，采用RT-PCR和RACE技术相结合的方法，获得茉莉花香气形成 限速酶即5–磷酸脱氧木酮糖合成酶（Deoxyoxylulose-5-phosphate synthase，DXS）基因（命名为JsDXS）； 采用染色体步移技术获得该基因的启动子序列；采用实时荧光定量PCR技术检测该基因在花瓣发育过程 中的表达动态。结果表明，JsDXS全长cDNA 为2 505 bp，其中ORF（Open Reading Frame）为2 145 bp， 编码714个氨基酸，含有TPP-DXS、TPP-PYR-DXS-TK-like和Transketolase C等保守功能结构域；分离 得到JsDXS基因上游调控序列745 bp，其含启动子核心元件TATA-box及T/GBOXATPIN2（茉莉酮酸酯 相关元件）、CIACADIANLELHC（生物钟相关元件）、MYCCONSENSUSAT（低温相关元件）等与花香 形成相关的重要顺式作用元件；荧光定量PCR分析表明，该基因在18：00时表达量较低，随着时间的推 移逐渐上调，到夜间22：00时表达量达到最高，逐渐又出现下调的趋势，直至凌晨2：00时表达量降到 最低，说明该基因的表达受生物钟的控制。 关键词：茉莉花；香气；5–磷酸脱氧木酮糖合成酶；启动子；顺式作用元件；表达分析 中图分类号：S 685.16 文献标志码：A 文章编号：0513-353X（2014）06-1236-09 Cloning and Expression Analysis of Deoxyoxylulose-5-phosphate Synthase Gene Related to Aroma from Jasminum sambac and Isolation of Its Promoter SUN Jun1，CHEN Gui-xin1,*，YE Nai-xing1,2,*，Lü Shi-heng1，LIU Zhi-qin3，HUANG Wei1，and LIN Zhi-da1 （1College of Horticulture，Fujian Agriculture and Forestry University，Fuzhou 350002，China；2The Institute of Tea Science and Technology and Economy，Fujian Agriculture and Forestry University，Fuzhou 350002，China；3College of Life Science， Fujian Agriculture and Forestry University，Fuzhou 350002，China） Abstract：The full length cDNA sequence of Deoxyoxylulose-5-phosphate synthase gene（JsDXS） was cloned from Jasminum sambacby using RT-PCR and rapid amplification of cDNA ends（RACE） method. According to the 2 505 bp sequence，the promoter of JsDXS was i