[生物学]第一章核酸.ppt

第一章 核酸的结构和功能 Structure and Function of Nucleic Acid 目 录 第一节 核酸的种类和化学组成 第二节 核酸的结构 第三节 核酸的理化性质及其应用 第四节 核酸的制备、测定及研究技术 核酸的发现和研究工作进展 1868年 Fridrich Miescher从脓细胞中提取“核素” 1944年 Avery等人证实DNA是遗传物质 1953年 Watson和Crick提出DNA双螺旋结构模型 1966年 Nirenberg破译了遗传密码 1975年 Temin和Baltimore发现逆转录酶;Sanger建立DNA测序方法 1981年 T.Cech发现了核酶 1985年 Mullis发明PCR 技术 1990年 美国启动人类基因组计划(HGP) 1999年 中国获准加入人类基因组计划 2001年 美、英等国完成人类基因组计划基本框架 第一节 核酸的种类和化学组成 一、核酸的种类和分布 二、核酸的化学组成 三、核酸的生物学功能 一、DNA的分子结构 （一）DNA 一级结构 （二）DNA碱基组成的Chargaff规则 （三）DNA的二级结构 （四）DNA的三级结构 （一）DNA 一级结构 DNA的一级结构是由数量极其庞大的四种脱氧核苷酸，dAMP,dGMP,dCMP,dTMP通过3′5′-磷酸二酯键连接起来的线形或环形多核苷酸链。 DNA分子中核苷酸的排列顺序叫做DNA的一级结构，简称为碱基序列。 一级结构的走向规定为5′→3′。不同的DNA分子具有不同的核苷酸排列顺序，因此携带有不同的遗传信息 （二）DNA碱基组成的Chargaff规则 Chargaff首先注意到DNA碱基组成的某些规律性，在 １９５０年总结出DNA碱基组成的规律： 1. 同一生物的不同组织的DNA碱基组成相同； 2. 同一种生物DNA碱基组成不随生物体的年龄、营养状态或者环境变化而改变； 3. 几乎所有的DNA，无论种属来源如何，其腺嘌呤摩尔含量与胸腺嘧啶摩尔含量相同［A］ =［T］，鸟嘌呤摩尔含量与胞嘧啶摩尔含量相同［G］ =［C］，总的嘌呤摩尔含量与总的嘧啶摩尔含量相同［A］＋［G］=［C］＋［T］。 4. 不同生物来源的DNA碱基组成不同，表现在A＋T/G＋C比值的不同。这些结果后来为DNA的双螺旋结构模型提供了一个有力的佐证。 DNA超螺旋的形成 超螺旋状态的定量描述 核小体盘绕及染色质示意图 二、RNA的分子结构 （一）RNA一级结构和类别 （二） tRNA 的分子结构 （三） rRNA的分子结构 （四）mRNA的分子结构 （一）RNA的类别和一级结构 （二) tRNA 的分子结构 tRNA 的二级结构 ——三叶草形 tRNA的三级结构 —— 倒L形 第三节 核酸的理化性质及其应用 一、核酸的一般性质 二、核酸的紫外吸收性质 三、核酸的变性、复性和分子杂交 一、核酸的一般性质 1、性状：DNA为白色纤维状固体，RNA为白色粉末。 2、粘性：核酸的水溶液粘度很大，DNA分子粘度大于RNA。核酸变性后，粘度下降。 3、溶解性：RNA和DNA都是极性的化合物，两者都微溶于水，不溶于乙醇、乙醚、氯仿等有机溶剂。它们的钠盐易溶于水。DNA和RNA在细胞内都与蛋白质结合成核蛋白。 DNA蛋白在低浓度的盐溶液中随盐浓度的增加而增加，在1mol/L的NaCl溶液中溶解度比纯水高2倍，在0.14mol/L的NaCl溶液中溶解度最低，仅为水的1%，几乎不溶解； RNA蛋白在盐溶液中其溶解度受盐浓度的影响较小，在0.14mol/L的NaCl溶解度较大。因此，在核酸的提取中，常用此法将两种核蛋白分开，然后用蛋白质变性剂去除蛋白质。 4、核酸的酸碱性质 核酸的磷酸基具有酸性，碱基具有碱性，因此，核酸具有两性电离的性质。但核酸中磷酸基的酸性大于碱基的碱性，其等电点偏酸性。DNA的pI约为4～5，RNA的pI约为2.0～2.5，在pH7～8电泳时泳向正极。 二、核酸的紫外吸收性质 1、光吸收： 紫外吸收波段：240－290nm 最大吸收峰：260nm 2、变性后的光学性质： （1）增色效应： 与天然DNA相比，变性DNA因其双螺旋结构破坏，使碱基充分外露，因此，紫外吸收增加，这种现象叫增色效应。 （2）减色效应： 若变性DNA复性形成双螺旋结构后，其紫外吸收降低，这种现象叫减色效应。 DNA的紫外吸收光谱 2.判断核酸样品的纯度 DNA纯品: OD260/OD280 = 1.8 RNA纯品: OD260/OD280 = 2.0 三、核酸的变性、复性