PCR级的质量单位换算.docVIP

PCR级的质量单位换算 ?DNA的检验方法及指标、单位换算 副标题： 2002-8-1 作者：liver411? 来源：HBV论坛 　　目前检验病毒的方法，除去血清培养基方法（HIV， CMV， HBV等病毒很难在培养基中分离检验），大致有三种:： 　　PCR (polymerase chain reaction 或RT-PCR等)，最常用的方法，很敏感，但误差大，价钱比较贵，通常单位用 copies/ml of plasma； 　　bDNA (branched chain DNA assay)， 也是目前常用的方法，敏感，常规化，结果比较稳定，价钱比较便宜，通常单位用 units/ml of plasma (pg/ml， fg/ml)； 　　NASBA (nucleic acid sequence-based amplification)，不常用，很敏感，误差大，工时长，价钱最贵，通常单位用 units/ml of plasma (pg/ml， fg/ml)； 　　 　　就HBVDNA而论，目前测验HBV DNA时通常要达到两个目的。一个是定性(qualitative)，另外一个是定量(quantitative) 。 　　HBVDNA定性的测验注重于HBVDNA的存在，它通常可以测到低于100copies/ml的病毒存在。当然还有更精确的方法，通常用于科研实验室中，可以测到更低的含量。 一般临床用的都可以测到1000-2000 copies/ml以上的精度。定性通常只给阴性、阳性的结果。 　　另外一方面，定量的测定着重于HBV DNA量存在的多少。通常用于定量的极限在0.1-5 pg/ml (1 pg/ml = 283，000 copies/ml)之间。同样，更精确的仪器可以测到0.001-0.005 pg/ml的精度。国外常用 fg/ml 为单位。copies/ml 比 fg/ml， pg/ml 单位更小。fg/ml， pg/ml 显示定量比 (?) X 10?易懂不容易错。 　　关于 copies/ml， pg/ml， fg/ml的换算大致如下: 　　Picogram: 1 pg = 10-12 g= 10-9 mg= 10-6 mg= 10-3 ng=?103 fg 　　Femtogram: 1 fg= 10-15 g= 10-12 mg= 10-9 mg= 10-6 ng= 10-3 pg 　　1 pg/ml = 283，000 copies/ml 　　HBVDNA正常指标 　　HBVDNA的正常指标或标准可以说是不能100%设定的。 　　定性测量的阳性通常说明病毒容易传染给他人， 阴性说明不容易传给他人。 一般讲血中测到少于1000copies/ml一下可为阴性。 　　定量测验， 因为结果是数字的， 而不是高低， 阴阳， 正常/不正常， 也就比较麻烦。确定正常值指标一定要知道所做实验的 参考范围 (reference range)。 参考范围是因测验的仪器，方法，试剂，病人年龄，性别，条件等而定的。 如，目前一般生产应用的Ultra Sensitive Quantitative PCR (高灵敏度定量PCR) 法的测验参考范围是在： 　　Less than 0.001 pg/mL 　　Less than 2.3 log copies/mL 　　Less than 200 copies/mL 　　Note: The reportable range is 0.001 to approximately 700 pg/mL， which is approximately equivalent to 2.3-8.3 log copies/mL (200 to 200，000，000 copies/ml)。 　　就是说这种方法可以测到参考范围是在0.001 到 700 pg/ml间， 约合在2.3-8.3 log 拷贝/毫升(200-200，000，000 拷贝/毫升)间；但是不同方法，仪器，批量这个范围不同而正常值(对照)也就不同。 现在技术先进，人们可以在大量生产时人为地把这个范围弄稳定/固定。 　　此外定量是根据拷贝/毫升决定多少而定。它只有量的定性! 只要测得到就是阳性，不是在一个病毒含量浓度没病，一个含量有病，何况测不到也不能说没病了 (下面细谈)。 　　所以要想知道结果的正确与否，含量高低等应该和所做DNA单位索取所用方法及仪器的参考范围及标准值或正常对照值。 　　查不到病毒DNA(Undetectable DNA)是不是就说明疾病治愈，不感染了? 　　查不到病毒的DNA不能说明已经不感染疾病，或者是治愈了。查不到病毒可能是因为现有仪器和水平不能测到更精确程度。目