实验3溶菌酶分离提纯.pptVIP

实验三 溶菌酶的分离提纯及鉴定  （一）分离提纯 【目的和要求】 【思考题】 了解并掌握从鸡蛋清中粗制备溶菌酶的原理及方法。 了解并掌握离子交换层析法分离提纯蛋白质的一般原理和操作方法。 【实验原理】 溶菌酶(lysozyme) 又称胞壁质酶，或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶 相对分子量为14600Da，由129个氨基酸残基组成 最适pH 6-7，最适温度为50℃ 切断细菌细胞壁多糖中NAM和NAG之间的β- 1,4糖苷键 等电点在11.0附近 【实验原理】 【实验原理】 1. 溶菌酶的粗提 溶菌酶耐热性较高，而其它杂蛋白在高温下变性沉淀 鸡蛋清液 酸性条件，85℃ 溶菌酶带正电荷，与酸根负离子生成可溶性盐 使溶菌酶与其他蛋白质分开，得到溶菌酶的粗提液 离心 离子交换层析（IEC）是基于待分离物质的酸碱性、极性等差异，它们与离子交换剂的亲和力不同，通过离子之间的吸附和脱吸附而将各组分依次从层析柱中洗脱下来，从而达到分离目的。 2. 溶菌酶的纯化 ——离子交换层析法 【实验原理】 CM Sepharose FF（快速羧甲基琼脂糖凝胶） 弱酸性阳离子交换剂 物理化学性质稳定、交换容量大、流速快、洗脱条件温和 琼脂糖凝胶—