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细胞融合实验
细胞生物学实验
题目：利用聚乙二醇（polyethyleneglycol，简称PEG）为媒介物进行细胞融合
姓名： 学号： 班级： 时间：
一、实验目的：
掌握利用聚乙二醇为介导物对各类细胞的融合方法。
二、实验原理：
当前普遍认为聚乙二醇分子能改变各类细胞的膜结构，使两细胞接触点处质膜的脂类分子发生疏散和重组，由于两细胞接口处双分子层质膜的相互亲和以及彼此的表面张力作用，使细胞发生融合。
三、实验用品：
显微镜，2.离心机，3.聚乙二醇（PEG），4.鸡血，5.Alsver液。6. 0.85%生理盐水液
GKN液
NaCl 8g，KCl 0.4g，Na2HPO4·2H2O 1.77g，Na2HPO4·H2O 0.69g，葡萄糖2g，酚红（phenolred）0.01g，溶于1000mL蒸馏水中。
50%PEG液
实验前临时配制，根据需要称取定量PEG（Mw=4000），放入刻度试管或刻度离心管内，在水浴中加热，使其溶化，如做细胞培养融合实验，可用高压蒸汽灭菌30min，待冷却至50℃时，加入预热至50℃等体积的GKN溶液，混匀。
四、实验步骤：
取制备的鸡红细胞悬液1mL,加入4mL0.85%生理盐水，混匀后以1000~1200r/min离心5min。
去上清夜后，将沉降血球（约0.1~0.2mL）加入GKN液至1~2mL，使之成为10%的细胞悬液。
取上述10%血球悬液1mL加入3mLGKN液是每毫升含血球15000万个，即15×107个/mL。
取上述浓度悬液0.5mL加入0.5mL 50%的PEG液混匀，置于30℃水浴中加热5min。
用吸管吸取以上细胞悬液，滴在载玻片上，盖上盖玻片，置于显微镜下观察。
五、实验结果：
细胞发生融合反应，观察到融合反应各个阶段细胞形态。
实验图片：
图1两细胞开始接触（10×40） 图2两细胞开始融合（10×40）
图3融合过程中的两细胞（10×40） 图4完成融合后形成的新细胞（10×40）
六、实验分析：
通过细胞融合技术有很多应用，例如可以进行单克隆抗体的制备以及植物新品种的培育。
在高倍镜下观察时要注意调节好光线亮度，以达到最好的观察效果。
加入PEG后要注意保温时间，如果时间过短，可能导致实验结果不理想。
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