[农学]第五章动物细胞制药1.ppt

第 五 章动物细胞工程制药 第一节 概述 随着细胞生物学、分子生物学、生物化学和基因工程学等一系列学科和技术的发展，原先的细胞培养技术已发展成为细胞工程学（cell engineering）。 动物细胞工程是根据细胞生物学、分子生物学及工程学原理，定向改变动物细胞内的遗传物质从而获得新型生物或特种细胞产品的一门技术。 该技术在生物制药的研究和应用中起关键作用，目前全世界生物技术药物中使用动物细胞工程生产的已超过80%，如蛋白质、单克隆抗体、疫苗等。 随着基因工程的发展，许多基因产物不能在原核细胞内表达，需要经过真核细胞所特有的翻译后修饰，以及正确的切割、折叠后，才能具有与自然分子一样的功能和抗原性。 用动物细胞做宿主细胞，经培养可生产如下生物制品： （1）病毒疫苗 如口蹄疫(FMD)、狂犬(Babies)、小儿麻痹症(Polio)、乙型肝炎(HbsAB)疫苗等。 （2）非抗体免疫调节剂 如干扰素(IFN)、白介素(IL)、集落刺激因子(CSF)、B细胞生长因子(BCGF)、T细胞替代因子(TRF)、迁移抑制因子(MIF)、巨噬细胞激活因子(MAF)。 （3）多肽生长因子 如神经生长因子(NGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)。血清扩展因子(SF)、表皮生长因子(EGF)、纤维粘结素(Fibronnectin)。 （4） 酶 如组织血纤维溶酶原激活剂(t-PA)、VII、Ⅷ因子等。 （5）激素 如红细胞生成素 (EPO)、促黄体生成素(LH)、促培养滤泡素(FSH)等。 （6）病毒杀虫剂 如杆状病毒等。 （7）肿瘤特异性抗原 如癌胚抗原(CEA)等 （8）单克隆抗体。 （9）细胞本身。 （10）皮肤重植。 大规模培养动物细胞生产生物制品始于本世纪50年代，Earle等开发出细胞培养基之后，主要是用于生产病毒疫苗。最初的生产方法是采用成百上千只体积小的培养瓶，后来又改用滚瓶培养。 1967年，Van Wezel开发了适合贴壁细胞生长的微载体，使得动物细胞的培养能够在搅拌釜式反应器中进行，大大提高了生产率。 1972年，Knazek开发了中空纤维反应器，使得细胞密度大为提高。 1975年，Koholor和Milstein创立了细胞融合技术，使得悬浮细胞的培养变得十分迫切，气升式反应器被应用于杂交瘤细胞的培养，以生产单克隆抗体。 1978年，Lim还开发了细胞微囊化技术，将非贴壁依赖性细胞包含在较小的颗粒状微囊中，使培养在搅拌釜式或气升式反应器中进行，并放大至1000L规模。 当前动物细胞工程制药所涉及的主要技术领域包括： 真核细胞的基因重组技术； 细胞融合技术； 细胞核移植技术； 染色体改造技术； 转基因动物技术； 细胞大规模培养技术等方面。 （1） 细胞融合技术 细胞融合指在诱导剂或促融剂作用下，两个或两个以上的异源细胞或原生质体相互接触，进而发融合并形成杂种细胞的现象。 细胞融合技术作为细胞工程的核心基础技术之一，不仅在农业、工业的应用领域不断扩大，而且在医药领域也取得了开创性的研究成果，如单克隆抗体、疫苗等生物制品的生产。 （2） 转基因动物技术 用转基因动物乳腺反应器生产药用或食品蛋白是生物制药领域研究的热点之一。 因为乳腺是一个外分泌器官，乳汁不进入体内循环，不会影响到转基因动物本身的生理反应，从转基因动物的乳汁中获取的目的基因产物，不但产量高、易提纯，而且表达的蛋白经过了充分的修饰加工，具有稳定的生物活性，因此又被称为动物乳腺生物反应器。 20 世纪80 年代中期，英国科学家克拉克首先在鼠的乳腺组织中进行了人抗胰蛋白酶因子基因的高效表达。 据美国遗传学会预测，到 2010 年，所有基因工程药物中利用动物乳房生物反应器生产的份额将高达95％。 国外现已有数十家以动物乳腺反应器为核心技术的公司，可生产：α1-抗胰蛋白酶、人红细胞生成素、乳铁蛋白、人血清白蛋白、人血红蛋白及人凝血因子Ⅸ、Ⅷ 和抗凝血酶Ⅲ、血纤维蛋白原、tPA等十余种稀有药品。 （3）细胞核移植技术 细胞核移植技术，是指