【2018年最新整理】卫生化学——紫外可见分光光度法.pptVIP

* 2．单波长双光束分光光度计 * * 特点： 不用拉动吸收池，可以减小移动误差 比切光器的频率慢的光源、检测器的波动不影响 可以自动扫描吸收光谱 * ３．双波长分光光度计 * 特点： 利用吸光度差值定量 消除干扰和吸收池不匹配引起的误差 比切光器的频率慢的光源、检测器的波动不影响 * 三种分光光度计的区别 第四节 分析条件的选择 一、溶剂选择 1.考虑溶剂的截止波长 截止波长：用1cm 光径的吸收池装溶剂，用空气为参比，改变照射波长，当吸光度A＝l时，此时的波长称为该溶剂的截止波长。 在选择测量波长时注意：溶剂必须能让所选择的光透过，即所选波长不能小于溶剂的最低使用波长（截止波长）。 * 2.考虑溶剂的极性 溶剂的极性对物质的吸收峰位置的影响不同 当极性增加时， π→π*的吸收峰发生长移（红移） n→π*的吸收峰发生短移（蓝移、紫移） △ E n →π* △ Eπ→π* △ E n →π* △ Eπ→π* 无溶剂化作用 有溶剂化作用 π π* n π π* n *  二、显色反应条件的选择 （一）显色反应及要求 1.显色反应 显色剂：能与无色物质生成有色物质的试剂 显色反应：将被测组分转变成有色物质的反应 常见的显色反应：配位、偶合、氧化还原反应 * 1．电荷迁移跃迁（亦称内 ox—red 过程） 所谓迁移跃迁是指用电磁辐射照射化合物时，电子从给予体向接受体相联系的轨道上跃迁，过程见下： N C H 3 C H 3 － + hv hv C R O + _ 吸收谱带较宽、吸收强度大、εmax≥104，是强吸收带。 电子接受体 电子接受体 电子给予体 电子给予体 电子接受体 电子给予体 （二）无机化合物的电子跃迁类型 * 2．配位场跃迁 　　四、五周期中的过渡金属元素分别有3d和4d轨道，镧系锕系分别含有4f和5f轨道， 在配体存在下过渡元素五个能量相等的d轨道和镧、锕元素七个能量相等的f轨道分别分裂成几组能量不等的d轨道及f轨道. 当它们吸收光能后，低能态的d电子或f电子可以分别跃迁到高能态的d轨道及f轨道上去。 一定要有配体的配位场作用. * 1．生色团（发色团）：能吸收紫外-可见光的基团 有机化合物：具有不饱和键和未成对电子的基团 具n 电子和π电子的基团 产生n→ π*跃迁和π→ π*跃迁 跃迁E较低 例： C＝C；C＝O；C＝N；—N＝N— 注：当出现几个发色团共轭，则几个发色团所产生的 吸收带将消失，代之出现新的共轭吸收带，其波 长将比单个发色团的吸收波长长，强度也增强 2．助色团：本身无紫外吸收，但可以使生色团吸收峰加强同时使吸收峰长移的基团 有机物：连有杂原子的饱和基团 例：—OH，—OR，—NH—，—NR2—，—X 5．红移和蓝移： 由于化合物结构变化（共轭、引入助色团取代基） 或采用不同溶剂后 吸收峰位置向长波方向的移动，叫红移（长移） 吸收峰位置向短波方向移动，叫蓝移（紫移，短移） * 三、光的吸收定律 （一）Lambert-Beer定律 一束单色光通过含吸光物质的溶液时 Ia 入射光I0 透过光It 反射光Ir I0＝Ia + It + Ir≈ Ia + It 由上式可知,I0不变，若 Ia↑则It↓,反之亦然 * 我们把：　　It／ I0 = T 称作透光率（度） T ×100 = T% 称作百分透光率（度） T越大，表示溶液对光的吸收越少 T越小，表示溶液对光的吸收越多 常用吸光度来表示物质对光的吸收程度： * 朗伯定律 (1760年) : A=lg(I0/It)=k1b 当入射光的λ,吸光物质的c 一定时,溶液的吸光度A与液层厚度b成正比。 比尔定律(1852年): A=lg(I0/It)=k2c 当入射光的λ,液层厚度b一定时,溶液的吸光度A与吸光物质的c成正比。 * 朗伯-比尔定律 式中：A：吸光度； T: 透射率； 　　　b：液层厚度(光程长度)，通常以cm为单位； 　　　c：溶液的浓度，单位mol·L-1或g·L-1； 　　　K：吸光系数 意义:当一束平行单色光通过均匀、非散射的溶液时，其吸光度与溶液中吸光质点的浓度和吸收层厚度的乘积成正比. * 值得注意的是： 透过率T与c或b之间的关系是指数函数关系． 吸光度A与c或b之间是简单的正比例关系． 1.0 0.5