【2018年最新整理】发酵豆粕与评估应用.pptVIP

发酵豆粕的评估 菌种 菌种：自产？外购？菌种生产的稳定性。 菌种的有益性能。 发酵豆粕的评估 根据蛋白质的溶解性，大豆蛋白可分为两类：清蛋白（非酸沉蛋白5%）和球蛋白（酸沉蛋白90%） 根据超速离心分析，大豆蛋白主要为11S（大豆球蛋白）和7S（β-伴大豆球蛋白）组分 大豆球蛋白占大豆籽实蛋白的19.5-23.1%（25-30%），占总球蛋白的40%，由酸性多肽（34-44ku）和碱性多肽（20ku）。 β-伴大豆球蛋白占大豆籽实蛋白的10-12.7%，占总球蛋白的30%,由α（58-77ku）、α‘（58-83ku）和β（42-53ku）三种亚基组成。 其它球蛋白含量低，抗原性也弱。 大豆抗原蛋白占豆粕总蛋白比例 大豆抗原与检测 由酸性亚基和碱性亚基组成 ELISA测定的是碱性亚基的含量 大多数acid肽链与IgE、IgM、IgA 有很强的结合活性，能引起致敏反应，结合区域位于酸性多肽192-306 残基处，碱性肽链则没有. Adachi M. Crystal structure of soybean 11S globulin : Glycinin homohexamer[J]. Plant Biology,2003(12): 7 395- 7 400. 11S 抗原蛋白 大豆抗原与检测 7S伴大豆球蛋白 由α、α‘和β三种亚基组成。ELISA测定的是β-亚基。 α亚基有很强的结合IgE、IgM、IgA 的活性，结合区域位于α亚基多肽链的232-383 碳原子处，α‘ 与β亚基则没有。 具有抗原性的关键在于内源性消化酶不能够对进行有效消化。 Maruyama N, Adachi M, Takahashi K, et al. Crystal structures of recombinant and native soybean β- conglycinin βhomotrimers [J]. European Journal of Biochemistry, 2001,268(12):3 595- 3 604. 大豆抗原与检测 SDS大豆抗原检测方法 优点：结果直观 缺点：难以准确定量 发酵豆粕抗原检测（SDS法） 豆粕 1 2 3 4 5 6 7 8 9 样品1-9分别为不同企业的发酵豆粕产品 蛋白哪去了？？ SDS结果显示了从豆粕（或发酵豆粕）中提取的可溶性蛋白的检测结果，蛋白的分子量范围10k-200kDa。 都变成小肽了？？ 抗原与抗体之间的特异性结合 抗原或抗体的固相化 抗体或抗原的酶标记，催化底物显色来进行抗原或抗体的定性以及定量检测 ELISA的优点：可准确定量 ELISA检测不同工艺产品会出现较大误差 试剂盒提取液浸提蛋白的SDS.6%KOH溶液浸提蛋白的SDS　 大豆球蛋白mg/g B-伴大豆球蛋白mg/g 1 148.85 132.47 2 34.51 22.79 3 46.08 38.72 4 51.15 89.83 5 103.71 86.74 6 66.68 51.82 7 23.47 6.34 8 10.43 4.33 9 4.01 5.26 ELISA方法检测对象 大豆球蛋白：base亚基 伴大豆球蛋白：β-亚基 根源产品致敏亚基消除得最好 分析：A、B ELISA检测结果显示β-伴大豆球蛋白和我们益生肽产品相差不大，大豆球蛋白益生肽产品比A 样的高。但是0.6%KOH-SDS条带A、B样的大豆球蛋白条带都比益生肽深，而且α和α条带位置下面多 了两条很明显的条带，且和豆粕原料不对应。我们的三个样品ELISA检测结果和0.6%KOH-SDS处理SDS 条带基本相同，而且相对应。 4.检测方法 抗原蛋白-0.6%KOH-SDS样品名称 水分 （%） 粗蛋白 （%） 小肽(占粗蛋白，%) KOH溶解度，%） 可溶性蛋白 mg/g (右列为干级) 抗原蛋白 mg/g (右列为干级) 测定值 干级 0.6%KOH处理 大豆球蛋白提取液 大豆球蛋白 β-伴球蛋白 140℃ 5min 8.30 52.04 56.75 20.18 82.03 208.01 226.84 84.53 92.18 51.56 56.23 109.00 150℃ 5min 6.68 53.18 56.99 19.93 79.20 191.94 205.68 98.20 105.23 46.63 49.96 73.71 160℃ 5min 6.91 52.92 56.85 17.65 75.26 158.86 170.65 131.0