[医药卫生]SDS实时荧光定量PCR操作指南.ppt

1、PCR 原理概述 2、Real Time PCR 化学原理 3、Real Time PCR 数学原理 4、Real Time PCR 数据分析 5、Real Time PCR 技术应用 6、技术支持 PCR是如何实现的? 传统PCR具有以下基本要素dsDNA（DNA模版）, Primers（引物）, dNTPs（核苷酸）, PCR buffer（缓冲液）, Taq polymerase（DNA聚合酶）等 PCR是如何实现的? 在控温模块（Temperature Block）上实现循环反应 Denaturating of template（模板变性） Annealing of oligos（引物退火） Extension of primers to make new products （序列延伸） PCR是如何实现的? 所需的片断会逐渐增多 PCR的数学基础 Xn = X0 ( 1 + Ex )n n = PCR循环数 Ex = PCR扩增效率 X0 = 起始目标DNA分子数 Xn = 第n个循环后的目标DNA分子数 理想情况下，Ex = 100%，Xn = X0 · 2n PCR的三个阶段 指数/对数扩增期 Xn = X0 · 2n（理想状态） Ex不变 线性扩增期 Ex逐渐变小 平台期 Ex = 0 什么是Real Time PCR? 实时监控特定核酸目标序