芜菁花叶病毒单克隆抗体的制备及检测应用.pdfVIP

44 卷 　2 期 微 生 物 学 报 Vol . 44 No . 2 2004 年 4 月 Acta Microbiologica Sinica April 　2004 芜菁花叶病毒单克隆抗体的制备及检测应用 1 ,2 1 1 1 施曼玲 　吴建祥 　郭 　维 　周雪平 ( 1 浙江大学生物技术研究所 　杭州 　310029) (2 杭州师范学院生命科学学院　杭州 　310012) ( ) 摘 　要 :先以芜菁花叶病毒 TuMV 免疫 BAL BC 小鼠,然后取其脾细胞使之与 SP20 鼠骨髓瘤细胞融合 ,经筛选 、 ( ) 克隆 ,获得 4 株能稳定传代并分泌抗 TuMV 单克隆抗体 MAb 的杂交瘤细胞 ,并以之制备腹水单抗 。4 株单克隆抗 体腹水 ELISA 效价在 10 - 5 ～10 - 6 之间 ,仅对 TuMV 起特异性反应 。Western blot 分析表明 ,4 株单抗都能与 TuMV 34kD 的外壳蛋白亚基起特异反应 。利用 TuMV 的多抗兔血清和单抗腹水建立了三抗体夹心 ELISA 检测 TuMV 的方 法 ,检测病叶的灵敏度为 1 ∶5120 倍 ,检测提纯 TuMV 病毒绝对量为 219 ng 。利用三抗体夹心 ELISA 测定出 7 种作 物上有 TuMV 侵染 。 关键词 :芜菁花叶病毒 , 单克隆抗体 , 三抗体夹心 ELISA 中图分类号 :S6412 　　文献标识码 :A 　　文章编号 (2004) ( ) 　　芜菁花叶病毒 Turnip mosaic virus , TuMV 是重 的羊抗鼠 IgG 为 Sigma 产品。 要的作物病毒病原之一 ,其寄主范围很广 , 可侵染 12 　病毒提纯 20 余科 202 种植物 ,其危害在十字花科作物上尤为 将 TuMV 分离物接种于青菜 , 15d 后采收病叶 , [ 1] ( ) [5 ] 严重 。TuMV 是马铃薯 Y 病毒属 Potyvirus 成员 , 按周雪平等 的方法提纯 TuMV 。 病毒粒子是弯曲线形 ,长约 720nm , 宽为 12nm 。病 13 　免疫 毒基因组为单链正义 RNA 。TuMV 一般不经种子传 [6 ] 按青 　玲等 的方法 ,用 TuMV 病毒抗原免疫 8 播 ,但可通过汁液和 40 多种蚜虫传播[2 , 3 ] 。 周龄的BAL BC 小鼠。 TuMV 在我国各地均有分布[4 ] ,发病严重 , 因而 14 　细胞融合 迫切需要建立快速准确的检测方法 ,帮助我们了解