论文尿激酶.docVIP

尿激酶的制备与研究进展 摘要：尿激酶是纤溶酶原的主要激活物之一。近年来的研究工作发现, 尿激酶在临床上发挥了重要作用，现在已经大量应用于治疗新鲜血栓性闭塞性疾病、肺栓塞、急性脑血栓形成、脑血管栓塞以及视网膜中央静脉血栓形成。本文对尿激酶的结构、作用机制及其制备等做了简要介绍。 关键词：尿激酶 纤溶酶原 分子组成 制备 Preparation, Rsearch and Delopment of Urokinase Abstract: Urokinase is one of the major activitor of plasminogen . Recent research found t- hat urokinase plays a very important role in a variety of other physiological and pathological proc- ess in recent research,including wound healing,tissue regeneration,cell migration,and especially i- ncluding cancer metastasis , angiogenesis and other physical and pathological process. The struct- ure of urokinase and its preparation are introducted in detail in this article. Keywords: urokinase plasminogen molecule structure preparation 1.前言 尿激酶型纤溶酶原激活物（简称尿激酶：urokinase 简写UK，)最初是从新鲜男性尿中提取[1]，以后又在血浆、脑水、精液以及肾细胞、血管内皮细胞、单核细胞、纤维母细胞、某些肿瘤细胞的培养液中发现[2-3]。它是一种溶血栓药物，是纤溶系统的重要一员,对防止血栓形成和保持血流通畅具有重要意义,它可将不具有丝氨酸蛋白酶活性的纤溶酶原激活为具丝氨酸蛋白酶活性、能溶解纤维蛋白的纤溶酶。因此，临床上多用于治疗血栓形成、血栓栓塞等症。 尿激酶的临床意义 传统上，尿激酶的主要作用被认为是激活纤溶酶酶原，最终导致血栓的溶解。缺乏尿激酶的小鼠有自发形成血管栓塞的倾向，该小鼠在缺氧或内毒素刺激时也易于形成血栓。下调正常小鼠中尿激酶的表达量也导致了内毒素刺激的纤维沉积4]。这些与尿激酶的溶栓作用相符合。尿激酶在临床药理中被广泛地应用于急性心肌梗死、肺栓塞和周边血管阻塞导管治疗中。 在临床上，人体内的UK水平与许多疾病有关。因此可以通过测定患者的UK含量来判断患者的症状。测定血液中的UK，因肝脏是UK的主要清除场所，故严重肝病患者血液中UK含量明显升高。例如，王力生等[5]测定13例失代偿性肝硬化、16例肝癌，14例慢活肝和15例急肝患者，血清UK含量均明显高于正常对照组。Kircheimer等测定28例肝肿瘤患者血浆中UK也明显升高，但51例肝硬化患者血浆中UK与正常对照组无明显差别。UK可从一些肿瘤细胞产生，所以某些肿瘤患者血浆中UK也可升高。除此之外，测定尿液中的UK，因正常人尿UK的分泌量相对稳定在一定程度上与性别、年龄、尿量等关系不大，24小时内波动不明显，其排泌与肾功能关系密切，可作为反映肾功能的一个指标[6]。Takada等测定31例原发性肾炎和8例继发性肾炎患者，其中UK含量均明显高于正常。 3 尿激酶的分子组成 3.1 尿激酶的分子量形式 尿激酶有多种分子量形式，主要有3.3×104和5.4×104两种，即低分子尿激酶(简写L-UK)和高分子尿激酶(简写H-UK)。据Nobuhara等人报道，H-UK和L-UK的比活分别为157，400和246，700IU/mg蛋白。用对硝基苯一对肌基苯甲酸盐鉴定，它们的活性部分各占97%和88%。已有不少国家从尿中分离出高纯度的H-UK和L-UK，并对其分子组成、酶学性质等作了研究[7]。 3.2 H-UK和L-UK的分子组成 现在人们己经搞清了H-UK是由分子量约为34000和17600的两条链通过二硫键连接而成的，在重链上有一个活性部位，丝氨酸和组氨酸是其活性中心的必需氨基酸，它的N末端氨基酸是赖氨酸和异亮氨酸。至于L-UK的分子组成问题，目前看法尚不一致。Seberauo等人认为L-UK是N末端为异亮氨酸的单链蛋白质。但Nobuhara等认为L-UK与H-UK一样，也有两条链。他们把H-UK和L-UK用1.5%二硫苏糖醇(dithiothrei-tol)在20℃处理18小时后，再进行SDS凝