[2018年最新整理]实验二 微生物培养基的配制和灭菌.ppt

实验程序3:培养基和玻璃器材的灭菌方法 干热灭菌法：电热烘箱作为干热灭菌器 加压蒸汽灭菌法 其步骤如下： 1.灭菌器内加入一定量的水，将用防水纸包扎好的物品放入其中。2.接通电源，进行加热。 3. 排除高压锅内的冷空气，可将排气阀打开，待排出大气后关闭排气阀；或关闭排气阀，待压力上升到0.5kg/cm2时再打开排气阀，待压力回复到0时再关闭排气阀。 4.当压力达15bl/in2（即1.05kg/cm2 , 0.1MPa）时，此时灭菌器内的温度为1210C，维持20-30min。 对热不稳定的培养基如含有葡萄糖、氨基酸等物时，应适当降低压力(0.06MPa,约112.60C)，30min。 5.灭菌时间一到，切断电源，待压力降至零时，才能打开排气阀，然后打开灭菌器盖，取出物品。 培养基和玻璃器材的 灭菌方法 培养基和玻璃器材的灭菌方法 间歇灭菌法： 待灭菌的物品放在灭菌器或蒸笼里，每天蒸煮1次，每次煮沸1h，连续3d重复进行。在每两次蒸煮之间，将物品（指培养基）放在370C恒温条件下培养过夜，这样可以使每次蒸煮后未杀死残留的芽孢萌发成营养体，以便下次蒸煮时杀灭。 培养基和玻璃器材的灭菌方法 过滤除菌法： 不能用加热灭菌的液体物质（如维生素、血清），一般可用细菌过滤器进行除菌。 培养基和玻璃器材的灭菌方法 紫外线灭菌法： 一般30W灯管，9m3空间，距地面2m每次打开紫外线照射0.5h，就使室内空气灭菌。若照射紫外线时先喷洒石炭酸等化学消毒剂，可增强灭菌效果。紫外线虽有较强的杀菌力，但穿透力弱，即使一薄层玻璃或水层就能将大部分紫外线滤除，因此只适用于空气及表面杀菌。 培养基和玻璃器材的灭菌方法 化学药剂消毒灭菌： 微生物实验室中常用的化学杀菌剂有升汞、甲醛、高锰酸钾、酒精、碘酒、龙胆紫、石炭酸、漂白粉、新洁尔灭、煤酚皂溶液，它们有的是杀菌剂，有的是抑菌剂。 培养基和玻璃器材的灭菌方法 培养基配制的原则 配制培养基的配方，及方法 培养基蒸汽灭菌原理，方法 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基 AmpR细菌的分离 培养基成分 牛肉膏 0.3g;蛋白胨 1g;氯化钠 0.5g;琼脂 2g;蒸馏水 100mL;pH 7.0～7.2;灭菌 1.05kg/cm2，20-25min 用量： 100-150mL/行；制备8-10个平板；2个/组（涂布/划线） 制作斜面（只需1个组制备）：无需抗生素 配制方法 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基-2 配制方法 称量：按培养基配方比例依次准确称取。注意：牛肉膏、蛋白胨。 溶化：在烧杯中加入约2/3所需水量，然后依次逐一溶化培养基各成分。 调pH：注意pH值不要调过头，以避免回调。 定容： 待各成分完全溶化后，补足水量至所需体积。 加琼脂（固体培养基）： 加入所需琼脂量，加热融化，补足失水。 分装、加塞、标记、包扎：分装入试管内或三角烧瓶内。注意：不要使培养基沾在管口或瓶口上。 (1)液体分装分装高度以试管高度的1/4左右为宜。 (2)固体分装分装试管，其装量不超过管高的1/5，灭菌后制成斜面。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。 (3)半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜，灭菌后垂直待凝。 灭菌：121.3℃， 20分钟高压蒸汽灭菌。如因特殊情况不能及时灭菌，则应放入冰箱内暂