利用16S rDNA建立种特异性PCR快速检测鸭疫里默氏菌.pdfVIP

卷 期 ! # 微 生 物 学 报 !（）： # # ’ #( 年 月 日 $%% $ ! !#$ %’()(*(+$ ,-$ ! )*+,-.,/ $%% !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 利用!# $%’ 建立种特异性()* 快速检测鸭疫里默氏菌 曲丰发，蔡 畅，郑献进，张大丙 （中国农业大学动物医学院农业部预防兽医学重点开放实验室 北京 #%%%=! ） 摘 要：鸭疫里默氏菌感染是危害养鸭业的主要疾病，用表型指标鉴定鸭疫里默氏菌存在不足，因此有必要建立检 测该菌的种特异性DEF 法。利用已登录的鸭疫里默氏菌、大肠杆菌、沙门氏菌、多杀性巴氏杆菌的#G ,HIJ 基因 序列，设计了一对鸭疫里默氏菌#G ,HIJ 基因的特异性引物 #=%@ 和2!,，分别以基因组HIJ 和菌落提取液为模 板，从 型鸭疫里默氏菌参考菌株和代表亚型、变异株和可能新型的国内分离株共 株细菌中均扩增出大小 # ’ #= $ 为C!+K 的特异性片段，而扩增鸭大肠杆菌、鸭沙门氏菌和禽多杀性巴氏杆菌等感染鸭的常见细菌的结果均呈阴 性。分别将鸭疫里默氏菌基因组 和菌落提取液进行 倍梯度稀释，基因组 的最小检出量为 ，菌落 HIJ #% HIJ C%KA 最小检出量为#CE)LM5N。结果说明，该DEF 法具有较好的特异性和敏感性，可用于快速鉴定鸭疫里默氏菌。 关键词：鸭疫里默氏菌； ；种特异性 #G ,HIJ DEF 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） O2( J %%%#3$%= $%% %#3%%#3%C 鸭疫里默氏菌（ ， ）感染 序列分析法，但不同研究报道的序列同源 !#$#%#’ ’(’)*#+), #% FJ #G ,HIJ ［，］ ! = 是家鸭、火鸡和其他多种鸟类的一种接触传染性疾 性有一定差异 。我们对 型 参考菌株 # ’ #= FJ ［］ # 和 个国内分离株的序列进行了测定和分析（未发 病 。自从郭玉璞等 #=2$ 年确定我国存在该病以 ( ［］ 来$ ，该病一直是危害我国肉鸭养殖业的主要疾病。 表资料），结果显示， 种内不同菌株间 FJ #G ,HIJ 基因的序列同源性为 （ FJ 感染常导致较高的死亡率和淘汰率，其发生和流