橙皮精油提取及抑菌活性的研究_修改过的-9.29.doc

橙皮精油提取及抑菌活性的研究 何娇明 黄铃惠 毛和英 李桂妹 黄琼 生物技术专业 2007级生物技术本科班 指导老师 陈莉 [摘要]目的：本文通过采用水蒸气法提取橙皮精油成分，并研究橙皮精油的抑菌活性，为研究开发新型，高级，安全的食品添加剂提供重要的参考价值。方法：采用滤纸片扩散法和平板稀释法比较橙皮精油对6种不同菌种的抑菌效力。结果：橙皮精油对6个菌种均有抑菌作用，其中对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌作用最强，最低抑菌浓度为10g/ml，而对白酒酵母和枯草芽孢杆菌抑菌作用最弱。结论：采用改进的水蒸气蒸馏法提取的橙皮精油纯度高，其成分对常见的菌种有广谱的抑菌作用。 [关键词] 橙皮；精油；抑菌作用；抑菌圈；最低抑菌浓度 橙子是热带、亚热带常绿果树属芸香科橙子亚科。我国是橙子的重要原产地之一，橙子资源丰富，优良品种繁多，有4000多年的栽培历史。橙子类果皮中富含橙皮精油，橙皮精油是天然香料精油中的一大类，其主要成分是萜烯类、倍半萜烯类以及高级醇类、醛类、酮类、酯类等组成的含氧化合物，无色透明，具有诱人的橙香味，在食品以及化妆品行业具有广泛的应用价值。发达国家非常重视橙子的采后加工，巴西是世界上最大的橙子生产和加工国，其中70%以上的橙子用于加工，而我国橙子加工用果仅占10%左右。橙子取汁后的皮渣除少量用于医药工业外，大部分被丢弃，对皮渣的处理已是橙子加工企业的一大难题。橙皮约占整果重的20%，其中含精油、色素、果胶和橙皮苷等有用成分，这些成分作为食品添加剂或药用物质，应用于食品、化妆品及医药领域，具有很高的经济价值。据统计，1吨橙子生产罐头后剩下的皮渣通过综合利用，可提取橙皮精油6公斤。原料广泛,成本低廉，技术简单，效益可观，是变废为宝，综合利用橙子类水果，提高产品附加值的一种有效途经[5]。因此橙皮精油的提取并研究其抑菌活性，是一项非常有意义的工作。 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 原材料 市售的新鲜橙皮。 1.1.2 主要器材 挥发油提取蒸馏装置、超净工作台、电热恒温箱、高压灭菌锅、水浴锅、微量进样器、培养皿、EP管、滤纸片(d=6mm)、接种环，涂布棒等。 1.1.3 主要试剂 牛肉膏蛋白胨培养基。具体配方：牛肉膏5.0g，蛋白胨10g，氯化钠5.0g，琼脂20.0g，水1000ml。加热融化，调pH7.4∽7.6 ，分装，高压湿热灭菌（121℃,20min），备用。 沙保培养基。具体配方：葡萄糖4.0g，蛋白胨1.0g，琼脂1.8g，蒸馏水100ml，加热融化，调pH6.0，分装，高压湿热灭菌(121℃,20min)，备用。 无水乙醇、丙三醇、氢氧化钠和氯化钠等试剂均为国产分析纯。 1.1.4 试验用菌种 大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、白酒酵母菌、黑曲霉6种菌种均由我院微生物实验室提供。 1.2 方法 1.2.1 橙皮精油的提取 称取300g新鲜橙皮，切成直径为4mm大小的碎片于圆底烧瓶中，以2:1放入蒸馏水。 如图1安装好仪器，并在提取筒中加入蒸馏水直到流入烧瓶为止。 加热至沸腾，回流，精油随同水蒸气一起挥发，冷凝于提取器中。 待提取器中油量不再增加时，停止加热，冷却。 半个小时后，开启提取器下活塞，将水缓缓放出至油层下降至“0”刻度，读取精油的体积，并保存以备用。 A、蒸馏烧瓶 B、提取筒 C、冷凝管 D、蒸气导管 E、回流支管 图1　挥发油提取蒸馏装置 滤纸片扩散法测定其抑菌活性 用无菌棉签蘸取适量已选择好浓度的各试验菌涂布于已倒好的平皿培养基中(细菌培养用牛肉膏蛋白胨培养基，真菌培养用沙保培养基)，再用无菌镊子夹起沾有适量精油原液的滤纸片放入含菌平皿中，每个平皿3张，以浸过无菌水的滤纸片作阴性对照。每种菌做2次平行，细菌经37℃培养24h，真菌经29℃培养24h，测量抑菌圈直径，取平均值。比较精油原液对各试验菌的抑菌效力。 1.2.3 平板稀释法——最低抑菌浓度测定(MIC) 将精油原液用适宜溶剂（丙三醇:无水乙醇=3:1）进行一系列倍比稀释，1ml提取液中含有橙皮材料加入到培养基中混合，然后用平板划线法接种各试验菌。每种菌做2次平行，同上条件培养后观察结果。完全没有菌生长的最低提取物浓度为该材料的最低抑菌浓度(MIC)，以有机溶剂（丙三醇:无水乙醇=3:1）作阴性对照。 结果 2.1 橙皮精油成分对试验菌的抑菌效力 表1 橙皮精油原液对试验菌的抑菌效力比较 材料 抑菌圈直径（mm） 大肠 杆菌 金黄色 葡萄球菌 枯草芽 孢杆菌 白酒 酵母菌 黑曲霉 白色 念珠菌 精油原液 12 12 15 12 15 14 阴性对照 / / / / / / 注:“/”表示无抑菌圈 由表1可以看出：阴性对照组无抑菌圈，表明蒸馏水无抑菌作用；精油原液对各试验菌种均