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第十二章 微生物工程下游工程简介 PAGE PAGE 115 第十二章 微生物工程下游工程简介 一、微生物工程下游工程概论 1、微生物工程下游工程的特点 1）发酵液是复杂的多相系统；2）所需产物在培养液中浓度较低；3）普遍存在下游工程代价高，回收率较低等问题 2、微生物工程下游工程的一般程序和操作单元 一般程序: (四大框架步骤) 1）发酵液的预处理和过滤：采用凝聚和絮凝技术加速固、液分离；如产物在细胞内，还要进行细胞破碎；2）提取：提取（初步纯化）目的是除去与目标产物性质差异大的杂质；3）精制：精制（高度纯化）是采用对产品有高度选择性的分离技术，除去与产物化学性质和物理性质相近的杂质；4）成品加工：最终获得质量合格的产品 3、主要操作单元 絮凝、离心、过滤、细胞破碎、萃取、沉淀、层析、结晶、干燥 二、发酵液预处理和过滤 一）发酵液的预处理 1、目的： 改变发酵液的物理性质，加快悬浮液中固形物沉降的速度；尽可能使产物转入便于以后处理的相中；能够除去部分杂质。 发酵液中杂质多且成分复杂，其中对纯化影响最大的是高价无机离子(Ca 2+、Mg 2+、Fe 2+等)和杂蛋白等。 2、高价无机离子的去除 钙离子的去除：常用草酸，与钙离子生成草酸钙沉淀。草酸为弱酸，对发酵产物的破坏较小，草酸钙沉淀还能促进蛋白质凝固，有利于提高滤液的过滤速度。草酸的溶解度较小，需大用量时，可用草酸钠取代；草酸价格较高，生产上一般需回收。 镁离子的去除：常用三聚磷酸钠，与镁离子形成可溶性络合物。 Na5P3O10 + Mg 2+ = MgNa3P3O10 + 2Na+ 铁离子的去除：常用黄血盐，与铁离子形成普鲁氏蓝沉淀。 3K4Fe(CN)6 + 4Fe 3+ = Fe4[Fe(CN)6]3↓ + 12K+ 3、可溶性杂蛋白的去除 杂蛋白的存在会降低离子交换树脂和大网格树脂的吸附量，如采用溶剂萃取，会发生乳化，影响两相分离。此外，在常规过滤和膜过滤时，还会使滤速下降，使膜受到污染。 1）沉淀法 调等电点： 因羧基的电离度比氨基大，所以大多数蛋白质的等电点都在酸性范围(pH4.0-5.5)。但仅靠调等电点还不能使大部分蛋白质沉淀。蛋白质是两性物质，在酸性溶液中，能与一些阴离子物质如三氯乙酸盐、水杨酸盐、钨酸盐、苦味酸盐、鞣酸盐和过氯酸盐等形成沉淀；在碱性溶液中，能与一些阳离子如Ag+、Cu 2+、Zn 2+、Fe 3+、Pb 2+等形成沉淀 2）变性法 变性蛋白溶解度较小。最常用加热法，加热不仅能使蛋白变性，还可降低液体黏度，提高过滤速率。其他方法：大幅度调节pH，加酒精、丙酮等有机溶剂或表面活性剂 变性法存在一定的局限，如加热法只适用于对热较稳定的目的产物；极端pH也会导致某些目的产物失活，且需消耗大量酸碱，而有机溶剂法通常只适用于所处理的液体数量较少的场合。 3）吸附法 加入某些吸附剂或沉淀剂吸附杂蛋白而将其除去。如四环素生产中，采用黄血盐和硫酸锌的协同作用生成亚铁氰化钾的胶状沉淀来吸附蛋白；在枯草芽孢杆菌发酵中，加入氯化钙和磷酸氢二钠，两者生成庞大的凝胶，把蛋白质、菌体及其他不溶性粒子吸附并包裹在其中而除去。 二）发酵液的过滤 1、质量比阻力（rB） ——单位滤饼厚度的阻力系数，与滤饼的结构特性有关，衡量过滤特性的主要指标。 对于不可压缩滤饼，比阻力值是常数；对于可压缩性滤饼，比阻力是操作压力差的函数： rB = r(⊿P)m r——不可压缩滤饼的比阻（对一定料液其值为常数）； m——压缩性指数，一般为0.5-0.8；不可压缩滤饼为0； ⊿P——压力差 发酵液多为非牛顿流体，滤渣为可压缩性的；发酵液滤饼的比阻与一般可压缩滤饼相比，有其特殊性。 一般可压缩滤饼的比阻是操作压力差的函数，在不变的压差之下，滤饼比阻力是一定值，即在不变压差下过滤时，过滤速度的逐渐下降是由于滤饼厚度的逐渐增加所致，而作为单位滤饼厚度的过滤阻力即滤饼比阻力是不变的。 但发酵液滤饼，即使在恒定的操作压差下，当滤饼中所含固形物浓度达到某一界限值时，滤饼的比阻力就不是一定值，而会突然升高，因此过滤速度不但随滤饼厚度的增加而下降，还会因滤饼比阻力的突然升高而额外下降。这是由于有机物质的胶体粒子借静电吸引而结合的水分子所致；对发酵液进行预处理，可以降低结合水的比率，使发酵液滤饼更接近一般可压缩性滤饼的性质。 2、常用过滤设备 1）板框(plate and frame)压滤机 板框过滤机结构图（曹军卫320页） 2）带式压滤机 3、影响发酵液过滤的因素 1）菌体细胞体积 真菌菌丝体较粗大，质量比阻小，发酵液不需经特殊处理就很溶液过滤；放线菌菌丝细而分支，交织成网格状，质量比阻力大，较难过滤，发酵液需经预处理，凝固蛋白质等胶体物质，提高过滤速度；细菌菌体更小，发酵液如不经絮凝