总黄酮含量测定方案.docVIP

总黄酮含量测定 一 样品溶液的制备 70%乙醇溶液，料液比1﹕8 ，80度下回流2h。 取10g样品放入圆底烧 瓶中加入80ml 70%乙醇溶液回流2h,抽滤定容至100ml备用。使用时先 离心再用70%乙醇稀释10倍做样品溶液。 二 芦丁标准品的配置 精密称取芦丁2mg，加无水乙醇定容至10ml。制得浓度为0.2mg/ml芦 丁标准品溶液。 三 显色方法的确定 1 扫描原液 分别取芦丁溶液和样品溶液各1ml，加无水乙醇定容至 25ml，空白对照，全波扫描。 2 硝酸铝显色法 分别取芦丁对照品溶液和样品溶液各5ml，加5%亚硝酸钠 溶液（1.25g亚硝酸溶于无水乙醇中定容到25ml容量瓶中) 1ml, 摇匀，放置6min，加10%硝酸铝溶液(4,4014g硝酸铝.九水溶于无水乙醇中定容到25ml容量瓶中) 1ml， 摇匀，放置6min，加4%氢氧化钠试液(2g氢氧化钠溶于无水乙醇中定容到50ml容量瓶中）10ml, 再加无水乙醇定容至25ml，摇匀，放置15min， 空白对照，全波扫描 bb 。 3 氯化铝显色法 分别取芦丁对照溶液和样品溶液各5ml ,加1%的氯化铝溶液（1g氯化铝溶于无水乙醇中定容到100ml容量瓶中)10ml，摇匀放置10min，空白对照，全波扫描。 4 氢氧化钾显色法 分别取芦丁对照品溶液和样品溶液各5ml，加3ml10%氢氧化钾溶液（2.5g氢氧化钾溶于无水乙醇中定容到25ml容量瓶中），充分摇匀显色5min后，用无水乙醇定容至25ml, 摇匀，空白对照，全波扫描。 四 显色条件的确定 五 标准曲线的绘制 分别取1ml,2ml,3ml,4ml,5ml,6ml芦丁对照品溶液，按所选的显色方法测定 吸光度，绘制标准曲线。 六 精密度实验 按标准曲线绘制方法，分别准确量取1.0ml芦丁标准液5份，按所选显色 剂和所确定的最优显色条件在所选波长下测定吸光度。 次数 1 2 3 4 5 吸光度 平均值 相对标准偏差RSD（%） 七 重现性实验 取火棘果样品5份各10g,按提取步骤制得样品液，按制备标准曲线方法显 色后测定吸光度值并计算总黄酮含量。 次数 1 2 3 4 5 总黄酮含量（%） 平均值（%） 相对标准偏差RSD（%） 八 稳定性试验 取制备好的同一样品溶液，将其显色后每10min测定一次，共测定7次， 记录吸光度并计算总黄酮含量。 比色时间(min) 0 10 20 30 40 50 60 总黄酮含量（%） 平均值 相对标准偏差RSD（%） 九 回收率实验 分别准确量取已知总黄酮含量为 mg/ml的1ml提取液5份，分别 加入一定量芦丁标准品，按上述方法进，测定吸光度，计算黄酮含量，根 据回收率公式计算出加样回收率。 回收率=（混合后测得量—样品中总黄酮含量）/芦丁标准品加入量 *100 样品号 样品中总黄酮含量（mg） 芦丁加入量（mg） 测定量（mg） 回收率（%） 平均回收率（%） 相对标准偏差RSD（%） 1 2 3 4 5 十 样品含量测定 分别取3份样品溶液各1ml, 按制备标准曲线方法显色后测定吸光度值并计算总黄酮含量。