比色法测定大血藤中总黄酮含量及其清除DPPH自由基-江苏农业科学.PDFVIP

— ３５６— 江苏农业科学　２０１４年第４２卷第１１期 王　伟，邹金美，黄冰晴，等．比色法测定大血藤中总黄酮含量及其清除ＤＰＰＨ自由基研究［Ｊ］．江苏农业科学，２０１４，４２（１１）：３５６－３５８． ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０１４．１１．１２７ 比色法测定大血藤中总黄酮含量 及其清除ＤＰＰＨ自由基研究 王　伟，邹金美，黄冰晴，赵晓丹，洪雅珍，张国广 （闽南师范大学生物科学与技术学院，福建漳州３６３０００） 　　摘要：以中药材大血藤［Ｓａｒｇｅｎｔｏｄｏｘａｃｕｎｅａｔａ（Ｏｌｉｖ．）Ｒｅｈｄ．ｅｔＷｉｌｓ］的乙醇提取物为对象，提出１种基于比色法的 大血藤总黄酮测定方法，同时考察了提取物对ＤＰＰＨ自由基的清除能力。结果表明，以芸香苷为标准品的亚硝酸钠－ 硝酸铝显色法更适合大血藤提取物中总黄酮含量的测定，测定波长为５１０ｎｍ，芸香苷在０～０．５ｍｇ／ｍＬ范围内，质量 浓度与吸光度呈良好的线性关系，平均加样回收率为９９．３％，精密度、稳定性、重现性均理想；抗氧化活性试验结果表 明大血藤提取物具有很强的清除ＤＰＰＨ自由基能力。 　　关键词：大血藤；总黄酮；紫外－可见分光光度法；抗氧化性；自由基 　　中图分类号：Ｒ２８４．２　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１４）１１－０３５６－０３ 　　中药大血藤是木通科植物大血藤［Ｓａｒｇｅｎｔｏｄｏｘａｃｕｎｅａｔａ Ｔｈｅｒｍｏ公司）；ＺＷＹ－２１０２Ｃ全温摇床（上海智城分析仪器制 （Ｏｌｉｖ．）Ｒｅｈｄ．ｅｔＷｉｌｓ．］的干燥藤茎，具有清热解毒、活血、祛 造有限公司）；万能粉碎机（天津泰斯特仪器有限公司）。 风止痛等功效，主治肠痈腹痛、热毒疮疡、经闭、跌扑肿痛、风 １．２　样品溶液的制备 湿痹病等症，主要产自湖北省、四川省、江西省、浙江省、江苏 用粉碎机将大血藤药材充分粉碎，准确称取药材粉末 省、福建省等地。大血藤在不同地区名称不一，《中药大辞 ０．５ｇ，置于烧杯中，加入６０％乙醇５０ｍＬ，封口后放入全温摇 典》记录的别名有：血藤、过山龙、红藤、千年健、血竭、血通、 床１２０ｒ／ｍｉｎ６０℃振荡浸提２４ｈ。浸提结束后超声破碎提取 ［１］ 大活血、活血藤等１０多种 。研究表明，大血藤含有多种化 ３０ｍｉｎ，超声破碎程序设定为超声 １５ｓ，间歇 １５ｓ，超声频率 学成分，包括黄酮类、酚类、有机酸、木脂素、三萜皂苷、蒽醌 ４０Ｈｚ，功率１０００Ｗ。超声结束后抽滤取过滤液，用６０％乙 类、糖苷类等物质，具有抑菌、抗炎、抗病毒、抑制血小板聚集、 醇定容至５０ｍＬ，得到１０ｇ／Ｌ样品溶液。 ［２－６］ 增加冠脉血流量、抗心肌等功效 。黄酮类化合物具有较 １．３　黄酮标准品溶液的配制 强的抗氧化、抗肿瘤、抗炎镇痛、抗病毒、保肝护肝、保护心血 称取芸香苷、槲皮素标准品各５ｍｇ，分别置于５０ｍＬ容 管系统、抑菌、抗衰老、提高免疫力等功效。大血藤中黄酮类 量瓶中，加适量无水乙醇将其完全溶解，纯水定容，得到 化合物受到很多研究者的关注［７－１３］。本研究以中药材大血 ０．１ｍｇ／ｍＬ芸香苷标准液、槲皮素标准液。 藤的乙醇提取物为对象，提出一种基于比色法的大血藤总黄 １．４　黄酮３种定量测定方法 酮测定方法，同时考察了提取物对ＤＰＰＨ自由基的清除能力， １．４．１　直接测定法　分别取大血藤提取物溶液、芸香苷标准 旨在为开发利用大血藤资源提供依据。 液、槲皮素标准液，用紫外分光光计在３００～８００ｎｍ波长范围 内进行光谱扫描，６０％乙醇作基线处理，记录吸光度。 １　材料与方法 １．４．２　三氯化铝法　分别取 １ｍＬ大血藤提取物溶液、芸香 １．１　材料 苷标