毒理学实验基本技术与操作方法.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * * * * ②兔耳静脉注射：兔耳缘静脉表浅易固定而常被采用。操作时，先固定兔子，而后用75%酒精棉球反复擦拭使血管充盈，左手食指、中指夹住静脉近心端，拇指绷紧静脉远心端，无名指和小指垫在耳下边，针从静脉末端刺入并顺血管方向平行刺入1cm左右，回抽有血后再用拇指固定针头，放开食指和中指将药液注入，拔针后用酒精棉球压迫几分钟，防止流血和消毒。 * * ③犬的静脉注射：多采用前肢内侧皮下静脉或后肢小隐静脉，在静脉血管近心端用橡皮带扎紧，使血管充盈，从静脉的远心端平行进针，回抽有血后松开橡皮带，将药液缓慢注入。 注射方式 小鼠 大鼠 豚鼠 兔 狗 腹腔 0.2～1.0 1～3 2～5 5～10 5～15 肌肉 0.1～0.2 0.2～0.5 0.2～0.5 0.5～1 2～5 静脉 0.2～0.5 1～2 1～5 3～10 5～15 皮下 0.1～0.5 0.5～1 0.5～2 1～3 3～10 几种实验动物不同注射途径常用注射量(ml) * * 六、大、小鼠生物材料的采集 (一) 血液的采集 大鼠尾静脉切割采血 1.尾静脉采血 ①静脉抽血 ②断尾采血 ③切割采血 * * 大鼠眼眶后静脉丛采血 * * 动物种类 最大安全采血量(ml) 最小致死采血量(ml) 小鼠 0.1 0.5 大鼠 1 2 家兔 10 40 犬 50 300 不同实验动物的最大安全采血量 * * (二) 尿液的收集 1.代谢笼集采法； 2.强制排尿法(压迫膀胱法、膀胱导尿法、膀胱体外穿刺法) ； 3.采用无菌手术法，制造输尿管瘘和膀胱瘘。 * * 代谢笼装置 * * 七、常用的大小鼠处死方法 1.颈椎脱臼法： 2.放血法：摘眼球、股动脉、心脏放血 3.断头法： 4.麻醉法：乙醚吸入、戊巴比妥钠注射 * * 注意事项 1.尽量减少动物的痛苦，尽量避免动物产生惊恐、挣扎、叫喊 (尽可能的缩短致死时间)； 2.注意实验人员安全，特别是在使用挥发性麻醉剂(乙醚、安氟醚、三氟乙烷)时，并且要远离火源； 3.不能影响动物实验的结果； 4.确认动物是否死亡，不能只看呼吸是否停止，还要看反射是否存在、肌肉松弛等状况来确认是否死亡； 5.动物尸体要妥善处理(焚化)； 6.禁止无关人员参加。 * * 谈谈你对实验动物3R原则的理解？ 思考题 * * 动物实验设计的基本原则及主要方法有哪些？ 不同途径染毒动物实验的基本操作技术、要点及注意事项。 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 4～6日龄双耳张开耸立。 * * 7～8日龄四肢发育，开始爬动游走，被毛逐渐浓密，下门齿长出。 9～l1日龄有听觉，被毛长齐。 * * 12～14日龄开眼，长出上门齿， 开始采食并学习饮水。 9～l1日龄有听觉，被毛长齐。 * * 3周龄离乳独立生活。 * * 正确地抓取固定动物，是为了在不损害动物健康、不影响观察指标、并防止被动物咬伤的前提下，确保实验顺利进行。 1.小鼠的抓取与固定 先用右手抓取鼠尾提起，置于鼠笼或实验台上向后拉，其向前爬行时，用左手拇指和食指抓住小鼠的两耳和颈部皮肤，将鼠体置于左手心中，把后肢拉直，以无名指按住鼠尾，小指按住后腿即可固定（图1-3、图1-4）。 该固定法常用作小鼠灌胃、腹腔注射、肌肉注射和皮下注射的实验操作。 图1-3 在笼盖上抓取小鼠 图1-4 徒手固定小鼠图 三、实验动物的抓取与固定方法 * * 手术固定法：用乙醚等麻醉药品麻醉后，用长20~30cm的线绳分别系 在四肢上，再把四肢的线绳分别系在固定板四角的钉子上，并且在头 部上颚切齿的地方牵一根线绳达到完全固定。 ?静脉给药时，先根据小鼠的大小选择合适的固定器，打开鼠筒盖，把小鼠放在里面，只露出尾巴；或者用倒放的烧杯将鼠扣住，只露出尾巴并压住。 * * 图1-5 小鼠的手术固定法 2.大鼠的抓取与固定 大鼠的抓取基本同小鼠，只是大鼠比小鼠性情凶猛，不易用袭击方法抓取。为避免咬伤，可带上帆布手套。采用左手固定法，用拇指和食指捏住鼠耳，余下三指紧捏鼠背皮肤