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产抗菌物质芽孢杆菌在农业生物防治中的应用与研究 摘要： 芽孢杆菌能分泌多种具有抗菌活性的次级代谢产物，主要包括抗生素、细菌素、抗菌蛋白、水解酶类以及挥发性物质等。本文主要介绍产抗菌蛋白芽孢杆菌在农业生物防治中的应用研究，并对其产抗菌物质类型、抗菌作用机理做简要论述。 关键词：芽孢杆菌；抗菌蛋白；农业生物防治 芽孢杆菌（Bacillus spp.）在防治植物病害中的研究应用非常广泛，从土壤传播病害到气流传播病害，从粮食作物病害到水果、蔬菜、花卉等经济作物病害都有涉及。这类生防细菌可以产生内生芽孢，抗逆能力强，繁殖速度快，营养要求简单，易定殖在植物表面。目前用于病害生防的芽孢杆菌种类有：枯草芽孢杆菌（B. subtilis）、多粘芽孢杆菌（B. polymyxa）、 蜡状芽孢杆菌（B. cereus）、地衣芽孢杆菌（B. licheniformis）、巨大芽孢杆菌（B.megaterium）、短小芽孢杆菌（B. pumilis）和蕈状菌变种（B. cereus var. 1mycoides）等。 1.芽孢杆菌分泌的主要抗菌物质 1.1抗生素（antibiotic） 是一类微生物产生的对其他微生物具抑制或杀死作用的非蛋白质的小分子化合物。抗生素一般在低浓度（小于 10ppm）下就能起抗生作用。蜡状芽孢杆菌（B. cereus）菌株 UW85 产生两种抗生素即 zwittermicin A 和kanosamine，其中 zwittermicin A 抑制苜蓿猝倒病菌（Phytophthora medicaginis）芽管的伸长，kanosamine 引起孢子囊膨胀。 1.2细菌素 是一种细菌产生的对亲缘关系较近的种或种以下不同菌株有抑制作用的抗菌物质，大多含有一些稀有氨基酸分子结构，而且一般是环肽。细菌素可分为低分子量多肽类、核苷酸类似物细菌素，与分高分子量蛋白质颗粒细菌素两大类，蛋白质颗粒细菌素有球形、椭圆形、棒形与带棒状尾部多面体等多种结构。枯草菌素（Subtilin）是迄今为止研究较深入的细菌素之一。它的前体是56个Aa小肽，其中24个Aa为信号肽经信号肽酶切除和一系列修饰如Thr脱水和Ser与Cys硫酯化可以形成32个Aa的活性小肽，具有抗酸和抗热的特性。Zheng等从枯草芽孢杆菌中分离出一种分子量为3.4kD细菌素，其对引致食品变质的细菌B. aureus和Salmonella typhimuritum有抑制作用，它可以作为一种抗菌物质应用于食品保鲜。 1.3抗菌蛋白 芽孢杆菌生长代谢过程中能分泌一些抑制植物病原菌的活性蛋白，这些蛋白在生防中的作用显著。芽孢杆菌产生的抗菌蛋白中包括多肽、脂蛋白和糖蛋白，结构有环状、线状和分支环状等。 枯草芽孢杆菌 BS-98 菌株产生的蛋白能强烈抑制苹果轮纹病菌（Physalosporapiricola）等植物病原真菌。其氨基酸组分分析表明该蛋白含11种不同的氨基酸，尤其富含谷氨酸和半胱氨酸等，此外，还有一些未知蛋白在抑制植物病原菌方面也表现出强烈的作用。 枯草芽孢杆菌JM4菌株能够产生JM4-A和JM4-B两种新型抗菌肽，分子量分别为1422.71D和1422.65D，这两种抗菌肽除了3个未知序列外，7个氨基酸序列组成相同，有很强的同源性。BS-2菌株分泌的抗菌多肽分子量≤2884.39Da，该多肽对热稳定并能抗紫外线照射，对炭疽病菌和番茄青枯病菌等多种植物病原真菌和细菌有强烈的抑制作用，对辣椒果实炭疽病具有69.79%（9d后）的防病效果。刘永锋等分离的枯草芽孢杆菌Bs-916对多种病菌具抑制活性，他们分别采用丙酮沉淀、PEG沉淀、等电点沉淀和超微浓缩等方法从Bs-916代谢液中获得的胞外抗菌物质具有蛋白质的性质。 蜡状芽孢杆菌（B. cereus）S-1 菌株的发酵液，经过酸沉淀和有机溶剂抽提，Sephadex G-100 与 DEAE－52 柱层析等步骤后，分离得到一种环状多肽 APS-1，同时进行了氨基酸组分分析。平板抑菌试验结果表明，APS-1对9种真菌的孢子萌发有抑制作用。李伟光等筛选出了拮抗菌B. cereus G35，其拮抗物具蛋白性质，部分纯化物对蛋白酶敏感。 还有一些对未鉴定种的芽孢杆菌抗菌蛋白研究与报道。刘晓妹等发现芽孢杆菌B1和B2的培养滤液对豌豆尖镰孢具有抑制作用，在两个菌株的培养滤液中分别检测出一种抗菌蛋白。辛玉成等苹果霉心病的生防菌株枯草芽孢杆菌XM16培养液中分离纯化得到一种抗菌蛋白。芽孢杆菌BS-98和B130菌株的抗菌蛋白对热稳定，对蛋白酶部分敏感。 2.生防菌的主要作用机制 生防菌的生防机制是多种多样的，如产生抗菌素、重寄生、溶菌作用、竞争作用和诱导抗性等。由于大多数据是在试验条件下获得的，而田间条件要复杂的多，所以实际上可能两种或三种机制