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分光光度法分析技术辅导( Spectrophotometry ) 分光光度法基础郑国经 前 言 分光光度法的特点 分光光度分析的基本理论 光度法分析条件的选择 光度法中主要显色剂类型及其应用 ※光度法的主要测定方式 分光光度计的仪器原理、结构 分光光度计仪器的安装和调试 前 言 自然界中很多物质都是有颜色的，它是因其对不同颜色的光的吸收或反射所产生。很多化合物在溶液中也常常具有不同的颜色，而且即使本身没有颜色也会因其与某些试剂发生反应而显现颜色。同时这些颜色的深浅与物质的浓度有关，因此人们便利用比较颜色深浅来测定物质的含量。这就是古老的比色分析法。 最初采用目视比色，接着出现了光度计，采用了光电比色法。随着科学技术的发展和人们对物质选择性吸收不同波长光的深入研究，出现了各种类型、性能优越的分光光度计和高灵敏显色体系，发展成为目前广为应用的分光光度分析技术。 分光光度法的特点 分光光度法是采用分光器(棱镜或光栅)获得纯度较高的单色光，是基于物质对单色光的选择性吸收来测定物质组分的分析方法。 分光光度法具有灵敏度高、准确度和稳定性较好、操作简便、适用范围广、所需仪器简单价廉等特点： (1) 灵敏度高，用于微量组分的测定，其浓度下限为10-5~10-6 mol/L，测定下限可达10-3%~10-4% 。 (2) 准确度和稳定性较好，尽管准确度不及滴定分析法和重量分析法，但精密测量, 相对误差可在1~2%, 适合低含量成分测定。 (3) 操作简便快速，该法主要包括试样的溶解, 被测组分的显色和吸光度的测量三部分,一般可不经分离直接测定。 (4) 适应范围广，不仅能测定微量组分，也能测定含量较高的组分，例如采用示差分光光度法或光度滴定法等 。 (5) 所需仪器简单价廉，所采用的分光光度计是各实验室广泛使用的仪器。 分光光度分析的基本理论 1、分光光度分析的原理 光是一种电磁波，具有波动性，能产生折射、衍射、偏振和干涉等现象(光波)。同时具有微粒性，能产生光电效应(光子)。—普朗克公式. 理论上，将具有某一波长的光称为单色光，由不同波长的光组成的光称为复合光。人眼能产生颜色感觉的光区称为可见光区，其波长范围约为 380～760 nm。200～380 nm范围的光称为近紫外光。 具有不同分子结构的各种物质，有对电磁辐射显示选择吸收的特性。有色物质的溶液对不同波长的入射光线有不同程度的选择性吸收。分光光度法就是基于这种物质对电磁辐射的选择性吸收的特性而建立起来分析法，属于分子吸收光谱法。 在冶金分析上广为应用的是紫外-可见分光光度法。碳硫分析属于红外吸收光谱法。 2、物质的颜色和光的选择性吸收 普朗克公式 光子的能量E决定于光的频率： E＝h·?＝h·c/? 式中:E为光子能量,J；h为普朗克常数(6.626×10-34J·s) 分子吸收光谱形成中所吸收的能量与电磁辐射的频率成正比，符合普朗克条件： ?E＝E2－E1＝h? ＝h·c/? 式中，?为辐射频率；c为光速；?为波长。 当分子吸收了外来辐射能之后,它的能量变化?E,为其振动能变化(?E振)、转动能变化(?E转)、电子运动能量变化(△E电子)的总和，即： ?E＝?E振 + ?E转 + ?E电子 其中：?E电子最大，一般在1～10 eV。 若设?E电子为5 eV，相应的吸收光谱中被吸收光波的波长应该是：?＝hc/?E电子＝2.48×10-5cm＝248nm 因此，由于分子内部电子能级变化而产生的光谱位于紫外区或可见区及红外区内。 3、光吸收的基本定律 有色溶液对光的吸收程度，与该溶液的液层厚度、浓度以及入射光的强度等因素有关。 吸光度：溶液对光的吸收程度，用符号A表示。 光度法中，将 lgI0/I 定义为吸光度。 A＝ lg(I0/I) 透过率：入射光透过溶液的程度(%)，称为透光度。用符号T 表示。 T＝I/I0 即用透射光强度与入射光强度之比。 吸光度与透过率的关系为： A ＝ lg(I0/I) ＝ lg(1/T) =－lgT 朗伯-比尔定律—光吸收的基本定律 如果保持入射光的强度不变，则光吸收程度(A)与液层厚度及溶液的浓度有关。其定量关系式为： 上式: 称作朗伯-比尔定律，它是分光光度分析的定量基础。 这个关系式仅适用于单色光及均匀非散射的液体、固体和气体。 朗伯-比尔定律—是由表示液层厚度和光吸收关系的朗伯定律(A=lgI0/I=K1l) 及表示溶液浓度与光吸收关系的比尔定律(A=lgI0/I =K2c) 合并而得。 分光光度分析是