2005年版药典3部部分附录.doc

2005年版药典三部部分附录 1．无菌检查法（修订） 2．支原体检查法（增修） 3．病毒外源因子检查法（修订） 4．热原质检查法（修订） 5．细菌内毒素检查法（修订） 6．崩解时限检查法（新增） 7．融变时限检查法（新增） 8．最低装量检查法 （新增） 9．装量（片重）差异检查法（新增） 10．粒度检查法 （新增） 11．抗毒素F（ab）2测定法（修订） 12．絮状单位测定法（新增） 13．A群脑膜炎球菌多糖疫苗多糖分子大小测定法（增修） 14．伤寒Vi多糖分子量大小测定法（新增） 15．乙醇残留量测定法（康卫氏扩散皿法）（新增） 16．蛋白质含量测定（双缩脲法）（新增） 无菌检查法 无菌检查法系指用微生物培养法检查生物制品是否无菌的一种方法。 无菌检查应在洁净度为10000级环境中的局部洁净度100级、单向流空气区域内或无菌隔离系统中进行，其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染。单向流空气区、工作台面及无菌隔离系统必须进行洁净度验证。 各种生物制品的无菌检查，均应按照本附录的规定进行，有专门规定者除外。 1 仪器 1.1 取样用灭菌注射器，5、10ml(供直接接种法用)。 1.2 全封闭式集菌培养器，滤膜孔径不大于0.45μm，膜直径约50mm （供薄膜过滤法用）。 1.3 普通显微镜（细菌镜检用）。 2 培养基及其制备方法 培养基应适合需氧菌、厌氧菌或真菌的生长，可按以下处方制备，亦可使用按该处方生产的符合规定的干粉培养基。 2.1 需氧菌、厌氧菌培养基1（流体硫乙醇酸盐1，用于培养需氧菌、厌氧菌） 胰酪蛋白胨(或酪素胰酶消化液，以总氮计2000mg) 15g 酵母浸出粉(或酵母透析液200ml) 5g 葡萄糖 5g 氯化钠 2.5g L-胱氨酸(或半胱氨酸盐酸盐) 0.5g 硫乙醇酸钠(或硫乙醇酸) 0.5g（0.3ml） 琼脂 0.65～0.75g 刃天青 0.01g 水 1000ml 除葡萄糖和刃天青外，取上述成分加入水中，微温溶解后，调节pH为弱碱性，煮沸，滤清，加入葡萄糖和刃天青，摇匀，调节pH值使灭菌后为7.1±0.2。 在供试品接种前，培养基氧化层的颜色（红色）不得超过培养基深度的1/3，否则，须经水浴煮沸加热20分钟，迅速冷却。只限加热一次，并防止被污染。 2.2 需氧菌、厌氧菌培养基2 (流体硫乙醇酸盐培养基2) 按需氧菌、厌氧菌培养基1处方，删除琼脂，取其余成分，如法配制，即得。 2.3改良马丁培养基（用于培养需氧菌、真菌） 蛋白胨 5g 酵母浸出粉 (或酵母透析液200ml) 2g 葡萄糖 20g 磷酸氢二钾 1g 硫酸镁 (MgSO4 ?7H2O) 0.5g 水 1000 ml 0.1%虎红 2 ml 除葡萄糖外，取上述成分加入水内，微温溶解后，调节pH值约为6.8，煮沸，加葡萄糖溶解后，摇匀，滤清，调节pH值使灭菌后为6.4±0.2。 2.4 营养琼脂培养基 蛋白胨 10g 牛肉浸粉 5g 氯化钠 5g 琼脂 14g 水 1000ml 取上述成分加入水中，微温溶解后，调节pH值为弱碱性，煮沸，滤清，调节pH值使灭菌后为7.2±0.2。 上述培养基一般分别按10 ml、40 ml、100 ml或200 ml分装于试管或其他容器中，装量为试管或容器高度的2/5，均以115℃灭菌30分钟。细菌培养基经30-35℃培养3天，改良马丁培养基经20-25℃培养3-5天后，应无菌生长。合格的培养基使用期限不得超过一周。 3 培养基灵敏度检查 3．1 菌种 由国家药品检定机构分发。 3.1.1 需氧菌 乙型溶血性链球菌(CMCC 32210株)，短芽孢杆菌(7316株)。 3.1.2 厌氧菌 生孢子梭状芽孢杆菌(CMCC 64941株)。 3.1.3 真菌、白色念珠菌（ATCC 10231） 3．2 菌液制备 将乙型溶血性链球菌、生孢子梭状芽孢杆菌、短芽孢杆菌分别接种于被检的培养基，经30～35℃培养一定时间 (乙型溶血性链球菌和生孢子梭状芽孢杆菌培养24～48小时，短芽孢杆菌培养18～20小时)后，将乙型溶血性链球菌和短芽孢杆菌分别刮入0.9%无菌氯化钠溶液内制成均匀菌液；生孢子梭状芽孢杆菌先将菌液吸入灭菌的试管内，用0.9%无菌氯化钠溶液制成均匀菌液；白色念珠菌接种在改良马丁培养基上，置20～25℃培养2-3天后，刮入0.9%无菌氯化钠溶液制成均匀菌液。再将以上菌液稀释至与标准比浊管（由国家药品检定机构分发）相同之浓度，然后用0.1%蛋白胨水作10倍系列稀释， 分别制成10-8乙型溶血性链球菌菌液，10-7的短芽孢杆菌菌液、10-7生孢子梭状芽孢杆菌菌液及10-6白色念珠菌菌液。 3.3 培养基接种 将10-7的短芽孢杆菌、10-7生孢子梭状芽孢杆菌、10-8乙型溶血性链球菌和10-6 白色念珠菌菌液