人和老鼠ZFY基因产生一个保守的睾丸特异性转录产物编码一小的酸性锌指蛋白并有修饰转活化的潜能精品.pptVIP

6. Zfy2/1融合基因在载体Sxrb老鼠中的转录产物 Sxrb缺失Zfy表达 RT-PCR 早期和晚期Zfy2/1 融合基因转录产物 XESxrb O(只有Zfy2/1基因) XYSxr b(有Zfy1, Zfy2和Zfy2/1基因)小鼠 外显子6的有无 间期次级精母细胞比 第二次减数分裂先中断 有完整的精子产生 有漏洞的 30-60d.p.p.不正常的 精子出现在睾丸小管 * 6. Zfy2/1融合基因在载体Sxrb老鼠中的转录产物 早期10 - 21 d.p.p。 晚期27 - 73d.p.p。 Zfy2的外显子5和 Zfy1的外显子10特异引物 XYSxr b和XESxrb O 睾丸Zfy2/1融合基因 两个阶段都有 Zfy2/1转录产物 正常的XY雄性鼠 * 6. Zfy2/1融合基因在载体Sxrb老鼠中的转录产物 早期阶段 没有外显子6的转录产物占优势 融合基因在 精母细胞被拼接 Zfy1 Zfy1和Zfy2/1的相似性 在后期表明这一情况在精子 XESxrb O 外显子1a或1b和外显子5 引物扩增Zfy2/1基因 融合基因是两个 Zfy2启动子转录的 * 6. Zfy2/1融合基因在载体Sxrb老鼠中的转录产物 zfy2外显子1a转录产物 (Cypt)在早期就没有发现 用外显子1a和6引物最先在 成熟的XYSxrb小鼠中检测到 Cypt启动子驱动的转录产物很容易在 出生30后XESxrbo雄性睾丸中发现 没有发现精子 * 6. Zfy2/1融合基因在载体Sxrb老鼠中的转录产物 XESxrbo老鼠精子 活性的特异性精子Cypt 启动子继续逃脱次级精母细胞 XYSxrb雄性鼠 Zfy2/1融合基因 Zfy1的外显子6 在精子中是怎么样拼接 特定Zfy2的外显子1a引物 和Zfy1的外显子8 有与无6外显子 扩增Zfy2/1 融合基因转录产物 剪接出外显子6发生 在精子细胞和精母细胞 * 6. Zfy2/1融合基因在载体Sxrb老鼠中的转录产物 3′RACE分析 Zfy2/1融合基因转录产物优先 使用标准的AATAAA polyA信号 而不是用精子细胞Zfy2上游AATATAAA信号 除了Zfy2编码区域的缺失 Sxrb 缺失最主要的结果 Zfy重组基因的表达 在精子和精母细胞中是一个较低的 转录水平编码全长的Zfy酸性链 * 7.人体特异性睾丸zfy转录产物编码一个短的酸性域 老鼠zfy1 基因外显子6 人zfy基因外显子3 zfy调节在人和鼠 之间调节差异很大 外显子2和4 引物进行RT-PCR 缺乏外显子3 的转录产物 老鼠，外显子3是第二编码外显子。 它长573 bp，编码大约一半的zfy激活域 * 8.在人减数分裂成熟期捕获特异性睾丸的zfy转录产物 减数分裂 人的zfy转录产物 缺乏外显子3被表达 组织学决定 减数分裂成熟捕获方法 两个缺乏精子的男性 睾丸内活体检测了它的表达 Ste-363 Y染色体的AZFb间隔缺失 粗线期中断 Apop12 细线期到偶线期 NO Y染色体缺失有早期中断 外显子2和4引物进行RT-PCR检测 zfy转录产物 有没有外显子3的表达 * 8.在人减数分裂成熟期捕获特异性睾丸的zfy转录产物 PRM1 and TNP1，特异性 生殖细胞减数分裂后的缺失 HPRT基因作为阳性对照 精子标记PRM1或TNP1缺失 zfy转录产物有 没有外显子3的存在 * 8.在人减数分裂成熟期捕获特异性睾丸的zfy转录产物 缺乏573bp的外显子3 生殖细胞 老鼠的Zfy1 人的zfy产生转录产物比MSCI先开始 * 9.zfy转录产物呈现在人精子 有和没有外显子3 转录产物的特异性重组引物 在精子RNA中 都检测到转录产物 zfy转录停止 组蛋白从核染色质移除并且精子延长时 RT-PCR 整个睾丸 主要的zfy转录 产物没有外显子3 * 10.zfy蛋白短的酸性域不会激活转录 酵母细胞（Saccharomyces cerevisiae）激活转录 Zfy2和Zfx酸性域能够融合到DNA相关的Gal4转录激活因子域 6个结构表达长的或短的老鼠 ZFY1, ZFY2和人的 ZFY基因 载体pGBKT7 Gal4 DNA相关域 酵母Y187菌株 LacZ(b-galactosidase)基因 Gal4 GAL1启动子 * 10.zfy蛋白短的酸性域不会激活转录 ZFY, Zfy2和Zfy1长的酸性域 编码激活的β乳糖产生像Gal4的酸性域 抗高表达克隆筛选的结果 长的ZFY2和Gal4-AD融合结构诱导最高