3株抗灰霉病放线菌的分离和鉴定-云南大学.PDF

云南大 学学报 ( 自然科 学版) , 2004 , 26 ( 3) : 270～274 CN 53 - 1045/ N 　ISSN 0258 - 7971 Journal of Yunnan University 3 株抗灰霉病放线菌的分离和鉴定 吴文龙 , 段淑蓉 , 李文均 , 段若玲 , 徐丽华 , 姜成林 (云南大学 云南省微生物研究所 ,教育部微生物资源开放研究重点实验室 ,云南 昆明　65009 1) 摘要 :从云南永胜 、中甸采集的土壤样品中分离到 3 株放线菌菌株 YIM3 1658 , YIM3 1679 , YIM3 1777 . 具有 很强的抗灰霉病活性 ,防效均达到 100 %. 通过对其进行形态特征 、生理生化特性 、细胞壁化学组分以及 16 S rDNA 序列等多相分类研究 ,确定其分属链霉菌属和链孢囊菌属. 关键词 :抗灰霉病 ; 16 S rDNA ;多相分类 ( ) 中图分类号 :Q 939 . 132 　　文献标识码 :A 　　文章编号 :0258 - 797 1 2004 03 - 0270 - 05 ( ) 　　灰霉病 B ot ry t is ci nerea 是一种多侵犯性植 培养 3～4 周. 经纯化后 ,用改良酵母膏 - 麦芽膏琼 物病原真菌. 寄主范围广泛 ,主要危害蔬菜 、果树 、 脂培养. 花卉等重要作物 , 引起果实腐败 ,根 、茎溃烂 , 叶斑 1 . 2 　形态观察 　用酵母浸汁 - 麦芽浸汁琼脂和甘 等 ,造成重大经济损失. 长期以来 ,灰霉病防治主要 油天门冬酰胺琼脂埋片培养 ,28 ℃分别培养 7 , 14 , 依赖多菌灵 、速克灵等化学药剂的使用. 由于病菌 2 1 ,28 d ,取埋片. 用光学显微镜和扫描电子显微镜 产生抗药性 ,使其防效大大降低 ,并且严重污染农 观察形态特征. 产品和环境 ,危及人畜安全健康. 因此 ,近年来人们 1 . 3 　培养特征和生理生化特性 　按 Shirling 和 通过筛选和利用抗灰霉有益微生物及其代谢物 ,从 Gottlieb [2 ] 等人的方法观察并记录培养特征和生理 而使生物防治正 日益成为灰霉病控制中的一条重 生化特性 ,碳源的利用. 用 ISCC COL OR CHA R TS 要而有效的途径. 色谱[3 ] 记录颜色. 从云南中甸 、永胜采集的土壤样品中 ,分离到 1 . 4 　细胞壁化学组成分析 　全细胞水解液化学组 3 株具有很强的抗灰霉病活性菌株 ,其发酵液的抗 分分析以 Hasegawa 等[4 ] 和王平[5 ] 改进的 TL C 方 菌效果稳定而持久 ,具有从中开发新型、高效 、无毒 法进行. 抗灰霉病生物农药的巨大潜力. 通过形态特征 、培 1. 5 　16S rD NA 序列分析 　总 DNA 的提取按徐 养特征 、生理生化特性 ,细胞壁化学组分以及 16 S 平等[6 ] 的方法. PCR 扩增使用以下引物 :Primer A : r