辣椒疫霉RxLR19781效应分子原核表达纯化及晶体生长条件的研选.PDFVIP

山东农业大学学报(自然科学版),2016,47(6):801-806 VOL.47NO.62016 Journal of ShandongAgriculturalUniversity (Natural ScienceEdition ) doi:10.3969/j.issn.1000-2324.2016.06.001 辣椒疫霉RxLR19781效应分子原核表达纯化 及晶体生长条件的研选 1 1 2* 方海珍 ,赵 立 ,朱春原 1. 山东农业大学植物保护学院 山东 泰安, 271018 2. 山东农业大学生命科学学院 山东 泰安, 271018 摘 要: 辣椒疫霉 （Phytophthoracapsici）侵染寄主细胞常分泌RxLR 效应蛋白分子，效应蛋白对寄主细胞具干扰或破 坏作用。为了深入开展辣椒疫霉RxLR 效应蛋白分子功能特性机制的研究，本文利用PCR 技术分离鉴定了辣椒疫霉 效应分子RxLR19781，以质粒pET28a(+)为表达载体、大肠杆菌Rosetta （DE3）为宿主，利用IPTG 诱导RxLR19781 蛋白表达，通过亲和层析、离子交换层析及分子筛层析纯化获得高纯度蛋白，借助坐滴法培养优化获得RxLR19781 X 2.76Å RxLR19781 RxLR19781 蛋白晶体， 射线衍射获得 的蛋白晶体数据，以便解析 蛋白三级结构，有助立足 蛋白 三级结构探索效应分子RxLR19781功能机制特性，为构建新型病害防控策略和培育持久抗病辣椒品种提供理论研究。 关键词: 辣椒疫霉菌;RxLR; 原核表达; 纯化; 晶体生长 中图法分类号:S436.418.1+2 文献标识码:A 文章编号: 1000-2324(2016)06-0801-06 Study on the Expression, Purification and Crystal Growth of RxLR19781 fromPhytophthoracapsici 1 1 2* FANGHai-zhen ,ZHAOLi ,ZHU Chun-yuan 1.Collegeof PlantProtection/ShandongAgricultural University, Taian271018,China 2.Collegeof LifeSciences/ShandongAgricultural University, Taian271018, China Abstract: Phytophthora capsici secrete large amounts of RxLR effectors to interfere with host plant cell physiology. However, their functions and molecular mechanisms in the interactions of oomycetes with host plants remain obscure. To understand the roles of these RxLR effectors in the interactions between P. capsici and its host plants, the gene RxLR19781 was cloned into pET-28a and expressed with IPTG in Rosetta (DE3). The target protein was