针对活细胞超分辨率显微镜进行优化的连续激光器-Coherent.PDFVIP

应用参考 针对活细胞超分辨率显微镜进行优化的连续激光器 随着各类超分辨率显微镜（纳米显微镜）技术（如PALM、STORM 和STED ）的应用越来 越广泛，对小型 连续激光器的需求不断增加，这类激光器拥有较高的输出功率、新型波长、理 想的光束质量和低噪音。 作者：Matthias Schulze ，Joris van Vunen ，董华芳; Joris.vanvunen@, Matthias.schulze@ ，lisa.dong@， 概述 和光荧光转移(RESOLFT) 显微镜或平行的RESOLFT 显 要增进对众多生物医学领域（脑神经科学、形态发 微镜（通常称为非线性或饱和结构照明显微镜 生、药物发现和疾病病理学）的了解，需要将分子化学 (SIM) ）。随机成像通常是指随机光学重建显微镜 与生物学过程联系起来。为了进一步了解单分子事件与 (STORM)、（荧光）光敏定位显微镜 ((f)PALM) 或直接 宏观结构和动力学之间的联系，研究人员越来越多的利 随机光学重建显微镜((d)STORM) 。 用超分辨率显微镜（或纳米显微镜）方法来突破传统衍 射对空间分辨率的限制。在本文中，我们将介绍新的激 光器技术如何为不同的超分辨率方法实现其所需的多种 输出特性。我们将对一种名为“STORM ”的方法进行检 测，了解华中科技大学黄振立教授带领的研究团队如何 将这类激光器与新的计算方法相结合，从而提高 图 1. STORM 显微镜的原理。(a) 通过小目标结构（灰线）中重叠的荧 光 团 观 察 宽 视 场 荧 光 图 像 STORM 和其他随机成像方法的速度和分辨率。 （蓝色区域），(b) 采用适当的激光器进行前期漂白后不留下或留下极 少的荧光，(c) 用激活激光器激活稀疏的单个荧光团，然后在应用激发 超分辨率显微镜方法概述 激光器（通常与前期漂白所用的相同）后发射荧光（蓝点）。(d) 再使 在过去，显微镜分辨率受到光衍射的限制。这意味 用激发激光器漂白荧光团。荧光团的中心位置（红色十字）要使用适当 着，可见光显微镜在 xy 平面中的最佳分辨率约为 200 的分子定位算法找到。中心位置（红点）的不确定性范围显著小于相同 nm ，而共聚焦显微镜在z 方向上的最佳分辨率约为 500 荧光团（左角的大蓝点）中单分子荧光的直径。(e) 重复进行超过 1000 次活化、激发、定位和光漂白过程，以重建（通过叠加荧光团的中心位 nm 。遗憾的是，这远远大于生物学家们现在要研究的许 置）目标结构（红线）的超分辨率图像。 多细微构造，因此限制了我们将分子与微观/宏观领域联 系起来的能力。最近，人们研发出了大量技术来克服这 这些超分辨率技术越来越多，它们对激光输出参数 一限制。现在，纳米显微镜系统的图像分辨率可精细到 的要求也不相同。例如，STED 等技术需要噪音非常低 20 nm ，甚至是20 nm 以下。这差不多是单蛋白质分子的 的激光器。某些方法仅需要几十毫瓦的输出功率，而某 大小！ 些方法则需要几瓦的输出功率。在使用共聚焦法以及使