[理学]第2章-色谱法-1.ppt

化学稳定性好。不能选与样品发生反应或聚合的溶剂，要 避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱子。 低粘度。若使用高粘度溶剂，势必增高压力，不利于分离。 常用的低粘度溶剂有丙酮、甲醇、乙晴等。但粘度过于低 的溶剂也不宜采用，例戊烷、乙醚等，它们易在色谱柱或 检测器内形成气泡，导致柱压波动，并影响分离. 流动相中所使用的不同溶剂必须互溶 无毒或低毒，易于操作，易于从其中回收样品；废液易处 理，不污染环境。 五、色谱分离条件优化 ——流动相流速、组成与洗脱方式优化 （2）流动相的种类与组成优化 ① 流动相选择的一般原则 ② HPLC对水的基本要求 水的等级 纯化水 蒸馏水 去离子水 波长 (nm) 纯化水 去离子水 吸光率 因为不纯物的存在，去离子的吸光率较高 配制流动相应用新鲜水，水质越高放置时间越短 理想的HPLC用水应为18.2Ω的超纯水，并通过0.22?m的滤膜，除去热源、有机物、无机离子及空气等。 五、色谱分离条件优化 ——流动相流速、组成与洗脱方式优化 （2）流动相的种类与组成优化 ③ 选择流动相的一般方法——单因素法 测量溶剂的洗脱能力 使组分的k值范围在1~10（可用范围）或2~5（最佳范围）间，重点组分的k约为3 根据不同色谱方法，确定首选溶剂系统 调整溶剂比例 洗脱能力不合适 洗脱能力适宜，但分离不能满足 寻找替代溶剂 洗脱能力适宜 分离不能满足 用等洗脱强度的不同溶剂系统代替原溶剂系统 五、色谱分离条件优化 ——流动相流速、组成与洗脱方式优化 （2）流动相的种类与组成优化 ③ 选择流动相的一般方法 五、色谱分离条件优化 ——流动相流速、组成与洗脱方式优化 （2）流动相的种类与组成优化 A B C ④ ⑤ ⑥ ⑦ ⑨ ⑧ ⑩ ④的组成为: A:B:C=0.5:0.5:0 ⑤的组成为: A:B:C=0:0.5:0.5 ⑥的组成为: A:B:C=0.5:0:0.5 ⑦的组成为: A:B:C=0.33:0.33:0.33 ⑧的组成为: A:B:C=0.67:0.16:0.16 ⑨的组成为: A:B:C=0.16:0.670.16 ⑩的组成为: A:B:C=0.16:0.16:0.67 ——Glajch三角形法 对于正相色谱: 首选甲醇、氯仿及二氯甲烷；底液选己烷 首选甲醇、乙腈及四氢呋喃；底液选水 对于反相色谱: （1）以某二元溶剂系统进行初步实验，调节混合溶剂的配比，使样品组分的k值在适宜的范围内，据此确定A点溶剂组成，并计算其溶剂洗脱强度； （2）根据A点溶剂强度计算出B和C点的溶剂配比，然后算出④?⑩点的溶剂组成。 （3）按A、B、C和④?⑦点溶剂组成分别配制流动相，进行7次色谱实验，评价分离效果。如某一溶剂体系下得到了理想的分离，则无须进一步实验；如分离都不理想，则进行步骤（4）的优化。 （4）按照⑧?⑩点溶剂组成分别配制流动相，进行色谱实验，评价分离效果;或者在某一小的等边三角形如 C-⑤-⑥或④⑥⑦构成的小三角形内进行探索。 ③ 选择流动相的一般方法 五、色谱分离条件优化 ——流动相流速、组成与洗脱方式优化 （2）流动相的种类与组成优化 ——Glajch三角形法 采用7点溶剂设计法分离9种取代萘的色谱图 ③ 选择流动相的一般方法 五、色谱分离条件优化 ——流动相流速、组成与洗脱方式优化 （2）流动相的种类与组成优化 ——Glajch三角形法 五、色谱分离条件优化 ——流动相流速、组成与洗脱方式 （3）洗脱方式的优化 等度洗脱（isocratic elution） 梯度洗脱（gradient elution） 在分离过程中，流动相的组成与性质保持稳定 组成流动相的两种或两种以上不同的溶剂按一定程序改变配比、极性、pH或离子强度等，通过流动相极性等的变化来改变待分离样品的选择因子和tR，提高分离效果和分析速度的洗脱方法 ① 液相色谱中的洗脱方式 液相色谱的梯度洗脱类似于气相色谱的程序升温 五、色谱分离条件优化 ——流动相流速、组成与洗脱方式优化 （3）洗脱方式 等度洗脱的问题 五、色谱分离条件优化 ——流动相流速、组成与洗脱方式优化 （3）洗脱方式的优化 梯度洗脱与等度洗脱的对照 色谱柱：Partisil (5?m，300mm?1.8mm ID)，溶剂：A为正己烷，B为二氯甲烷；等强度洗脱为40%(v/v) B 样品组分较少，性质差异不大 ——等度洗脱 样品组分多，性质差异大 ——梯度洗脱 五、色谱分离条件优化 ——流动相流速、组成与洗脱方式优化 （3）洗脱方式的优化 ② 梯度洗脱的特点 改善分离, 加快分析速度； 改善峰形, 减少拖尾, 有利于 痕量组分的检测； 增加峰容量； 强烈滞留的组分不容易残留在柱 上, 保持柱性能长期良好；