(生物技术制药展示课件）双特异性抗体制备方法进展.pptx

双特异性抗体制备方法进展 小组成员：温婷、张杨玲、崔影彤、杨杰琪 指导老师：张革副教授 01 | 背景 02 | 化学交联 03 | 杂交瘤细胞技术 04 | 基因工程制备 05 | 总结与展望 06 | 参考文献 背景 背景 4 双特异性抗体： 含有2种特异性抗原结合位点的人工抗体，能在靶细胞和功能分子(细胞)之间架起桥梁，激发具有导向性的免疫反应。 背景 5 双特异性抗体的优势 改变特异性免疫应答细胞的方向到癌细胞，增强癌细胞杀伤能力 通过和两个不同的细胞表面抗原结合，有效增强癌细胞靶向性 降低治疗费用 同时阻断两个不同的通路 背景 6 开发进展 背景 7 化学交联 化学交联 9 Chemical cross-linking（化学交联） 缺点：纯化困难、稳定性差、活性降低 制备方法： 分别连接交联剂 脱盐 混合，化学结合 化学交联 10 Controlled Fab-arm exchange (cFAE) 可控制的Fab臂交换技术 制备方法： 制备CH3突变的母抗体 铰链区链间二硫键 还原制备半抗体 重新形成二硫键不同半抗体结合 优点：可大规模生产（1500L） 杂交瘤细胞技术 杂交瘤细胞技术 12 Quadroma technology 杂交瘤细胞技术 制备方法： 融合两个分别表达不同抗体的杂交瘤细胞，两株异源抗体轻重链随机装配，形成混合双功能抗体。 重链的正确装配： 杂交瘤细胞技术 13 优点：保留了Fc段的生物学功能 缺点：轻链也会随机装配，这是我们不想要的 两类抗体使用序列相同的轻链，这种轻链可以和两类抗原结合 双细胞系分别表达半抗体 结合crossmab技术（把重链CH1区和轻链CL区交换）和knobs-into-holes技术 在VH-VL和CH1-CL的内表面引入新的突变 避免轻链的随机装配的方法 杂交瘤细胞技术 14 主要药物 Catumaxomab 第一个上市的双功能抗体（2009） 靶标：CD3+EpCAM 适应症：恶性腹水 FBTA05：CD3+CD20，临床1-2期 Ertumaxomab：CD3+Her2，临床2期 基因工程制备 基因工程制备 16 Genetic engineering of BsAbs基因工程制备双特异性抗体 利用分子克隆技术，可将一个抗体的部分/全部恒定区用于构建双特异性抗体。 基因工程制备 17 Ig-G样形式（含Fc段）： 基因工程制备 18 非Ig-G样形式 优势： 抗体尺寸更小 具有更好的肿瘤组织渗透性 每个亲本单克隆抗体的可变区和接头均可被克隆和连接。 基因工程制备 19 非Ig-G样形式——串联scFv 通过额外的肽接头如甘氨酸-丝氨酸重复基序连接的两scFv片段 最常用的结构域顺序： VLA-linker1-VHA-linker2-VHB-linker3-VLB 接头1和接头3的长度决定了scFv的聚合情况 接头2决定了两个scFv之间的运动灵活性 （VL和VH衍生自单链抗体片段; A和B代表亲本单克隆抗体A和B） 基因工程制备 20 非Ig-G样形式——Blinatumonmab 已上市，最着名的双特异性T细胞衔接器（BiTEs）之一 在大肠杆菌中不易表达，但在哺乳动物细胞中表达良好 靶点：CD3+CD19 两个较长的接头被置于轻链和重链之间，短接头以串联形式桥接两个scFv 短链接头阻止VL和VH结构域的链内而非链间配对，长接头允许抗原结合位点自由旋转 基因工程制备 21 四价串联双抗体（Tand-Abs） 含有连接在单个多肽链中的两对VL和VH结构域 在表达时，两种多肽产物以头对尾的方式二聚化，形成具有大分子量（〜105kDa）的同源二聚体 药物 AFM11是一种靶向CD19和CD3的四价双特异性TandAb，其在小鼠静脉内给药后的半衰期为18.4至22.9小时（Ⅰ期临床试验中） AFM13（进入Ⅱ期临床试验） 基因工程制备 22 半衰期延长策略 多聚化 与PEG链共轭连接（PEG化） 与人血清白蛋白（HSA）融合 与Fc片段融合 结论与展望 结论与展望 24 双特异性抗体的发展仍面临着许多问题 稳定性低 低表达率 免疫原性 生物利用度低 …… 除了化学交联、杂交瘤细胞技术、基因工程之外，还可以利用分子克隆技术、抗体工程等，对双特异性抗体的选择性进行改造，提高生物活性和临床疗效。 部分参考文献 部分参考文献 26 [1]Zhang X, Yang Y, Fan D, Xiong D. Bispecific