(药物分析学)第六章药物的含量测定.ppt

谢谢! 第三节 光谱分析 紫外分光光度法 （一）仪器校正与检定 波长校正：用汞灯中的较强谱线或仪器中氚灯的486.02nm、656.10nm谱线进行校正 吸收度的准确度检定：测定重铬酸钾的硫酸溶液在规定波长处的吸收系数进行检定 杂散光的检查：用碘化钠，亚硝酸钠溶液测定规定波长处的透光率 （二）对溶剂的要求 ——以空气为空白（空白光路中不置任何物质）测定溶剂的吸光度（使用波长附近应符合规定） （三）测定法 测定波长核对 （规定波长 ? 2 nm内），并以吸光度最大波长为测定波长 吸收度读数范围（0.3?0.7） 同批溶剂为空白试验（校正比色皿和空白溶剂的吸收） 测定方法 吸收系数法 对照品比较法 计算分光光度法 比色法 百分吸收系数法 A= E1%cm×C×L C（%） = A / E1%cm 样品% = F = 稀释倍数和浓度换算因子，W = 取样量 A ×F E1%cm ×W E值的大小反映了药物对某一波长光的吸收能力，也反映了测定反应的灵敏度。采用E法测定含量时，一般取三位有效数字表示，E值小于100的一般不宜采用 0.390 ×10×100 393 × 0.0105 = 含量% ×100 例1 己酸孕酮 称取己酸孕酮0.0105g, 加无水乙醇溶解后,置10ml容量瓶中,稀释至刻度,摇匀。吸取1.00ml, 置100ml容量瓶中, 加无水乙醇稀释至刻度, 置1cm吸收池内进行测定, 根据下列已知条件, 求出按干燥品计算的己酸孕酮百分含量。A=0.390, E1%1cm=393 ×100% 吸收系数（E1%cm）测定方法 精密称取被测物对照品适量（双份），加溶剂制成一定浓度的溶液，使吸光度在0.6～0.8之间 精密吸取适量，用同批溶剂将溶液稀释一倍 在规定波长分别测定高低浓度的溶液， 计算吸收系数（E）值， 要求： 在五种不同型号的紫外仪上测定 同一台仪器测定二份间结果的偏差应不超过1.0% 各台仪器测得的E值，RSD应不超过1.5% 取平均值为该药物的吸收系数（注明测定时温度） 对照品比较法 A样/A对 = C样/C对 样品%= A样/A对 × C对×F/ W×100% F=稀释倍数，W=取样量 双波长法，差示法，荧光法，均可应用此公式，以△A，荧光强度代替吸收度A 例2 盐酸吗啡片与注射液 本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于盐酸吗啡10mg)置100ml量瓶中，加水溶解至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液15ml，置50ml量瓶中，加0.2mol/L氢氧化钠25ml，用水稀释至刻度，摇匀，UV法测定。另取吗啡对照品适量，精密称定，用0.2mol/L氢氧化钠稀释至每ml中约含20ug的溶液，同法测定。计算，结果乘以1.317，即得C17H19NO3·HCl·3H2O的含量.(规格5mg) A样×C对×50 ×100 ×1.317 ×片重 A对×15 ×取样×1000 ×5 ×100% 1.317=M?3H2O/M=375.85/285.34 方法的特点与影响因素 特点：简便、快速、灵敏（10-4～10-7 g/ml）、有一定专属性和准确度（相对误差2%左右），应用范围广（制剂含量、溶出度、含量均匀度测定），仪器价廉易普及 影响因素：溶剂、溶液pH值 普鲁卡因 去氧肾上腺素 （三）计算分光光度法 双波长分光光度法（复方磺胺类药物的测定） 三点校正法（维生素A的） 解线性方程组法等 使用时应注意，当在吸收曲线的陡然上升或下降的部位测定吸光度时，波长的微小变化可对测定结果造成显著影响 （四）比色法 在药物分析中应用的比色法： 酸性染料比色法（含氮碱性药物如：硫酸阿托品片、氢溴酸东莨菪碱片的测定） 四氮唑比色法、异烟肼比色法和Kober反应法（甾体激素类药物） 蛋白质的双缩脲反应（硫酸软骨素的测定） 总黄酮、总生物碱的测定（中药制剂） 二、荧光分光光度法（Fluorescence Spectrophotometry） 荧光法测定的是物质分子的发射光谱。在一定条件下，物质的浓度与其荧光（也称发射光）强度成正比关系，可用于定量分析 测定方法 ——对照品对照法 Cx= Rx－Rxb Rr－Rrb ×Cr 荧光分析中，药物的浓度与相应的荧光读数之间的线性范围较窄，故(Rx－Rxb)/(Rr－Rrb)应在0.5～2，如超出此范围，应调节溶液浓度后再测定 荧光分析法的特点 灵敏（检测限可达10-10～10-12g/ml） 专属（?ex和?em） 适于低浓度溶液分析。浓度过大，荧光会发生“自熄灭”现象，导致荧光强度与溶液浓度不成正比 干扰因素多，如溶剂种类与纯度、溶液pH、温度，共存物质、溶液中的悬浮物、玻璃仪器的洁净度等，因此必须做空白试验