植病研究技术---分子生物学教学幻灯片.pptVIP

一. DNA/RNA/蛋白质的提纯 ---基因工程 感受态细胞（competent cell）：理化方法诱导细胞， 使其处于最适摄取和容纳外来DNA的生理状态。 CaCl2法： 　 将快速生长的大肠杆菌置于经低温（0℃）预处理的低渗氯化钙溶液中，便会造成细胞膨胀，同时Ca2+会使细胞膜磷脂双分子层形成液晶结构，促使细胞外膜与内膜间隙中的部分核酸酶解离开来，离开所在区域，诱导细胞成为感受态细胞 细胞膜通透性发生变化，极易与外源DNA相粘附并在细胞表面形成抗脱氧核糖核酸酶 的羟基－磷酸钙复合物。 此时，将该体系转移到42℃下做短暂的热刺激（90s），细胞膜的液晶结构会发生剧烈扰动，并随机出现许多间隙，外源DNA就可能被细胞吸收。进入细胞的外源DNA分子通过复制、表达，实现遗传信息的转移，使受体细胞出现新的遗传性状。 将转化后的细胞在选择性培养基上培养，筛选出带有外源DNA分子的阳性克隆。   一. DNA/RNA/蛋白质的提纯 ---基因工程 质粒提取 （碱裂解法） 离心集菌 溶液 Ⅰ悬浮 溶液 Ⅱ碱裂解 溶液 Ⅲ 中和 酚仿抽提 乙醇沉淀 质粒定性/定量 质粒提取试剂盒 一. DNA/RNA/蛋