脊尾白虾组织蛋白酶l基因的克隆及其表达分析.pdf

动 物 学 研 究 2013，Feb. 34(1): 39−46 CN 53-1040/Q ISSN 0254-5853 Zoological Research DOI ：10.3724/SP.J.1141.2013.01039 脊尾白虾组织蛋白酶 L 基因的克隆及其表达分析 1,2 1,* 1 1 1 1 段亚飞 ，刘 萍 ，李吉涛 ，李 健 ，高保全 ，陈 萍 1. 中国水产科学研究院黄海水产研究所 青岛 266071 ； 2. 上海海洋大学 水产与生命学院, 上海 201306 摘要：根据本实验室构建的脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)血细胞全长cDNA 文库获得的EST 序列，利用RACE 技术克隆获得脊尾白虾组织蛋白酶L 基因的cDNA 全长，命名为EcCatL 基因。该序列全长1136 bp，包括5非编码区 24 bp ，开放阅读框960 bp 和3非编码区152 bp，开放阅读框共编码319 个氨基酸，预测相对分子量为35.30×103 ，理 论等电点为5.27 。同源性分析表明，脊尾白虾组织蛋白酶L EcCatL 氨基酸序列与其它甲壳动物高度保守，与变色小长 臂虾(Palaemonetes varians)及北极甜虾(Pandalus borealis) CatL 的同源性分别为92%和76% 。系统进化分析表明，EcCatL 基因氨基酸序列与变色小长臂虾的CatL 聚为一支。荧光定量PCR 分析结果表明，EcCatL 基因在血细胞、鳃、肝胰腺、 肌肉、卵巢、肠、胃及眼柄中均有表达，其中肝胰腺中的相对表达量最高。感染鳗弧菌及WSSV 后6 h 和12 h，脊尾 白虾血细胞和肝胰腺中EcCatL 的表达量较对照组均极显著增加(P0.01) ，且具有明显的时间差异性，表明EcCatL 基因 在脊尾白虾免疫反应中具有重要作用。 关键词：脊尾白虾；组织蛋白酶L ；基因克隆；基因表达 中图分类号：Q959.223+.63; Q785; Q786 文献标志码：A 文章编号：0254-5853-(2013)01-0039-08 Cloning and expression analysis of Cathepsin L cDNA of Exopalaemon carinicauda 1,2 1,* 1 1 1 1 Ya-Fei DUAN , Ping LIU , Ji-Tao LI , Jian LI , Bao-Quan GAO , Ping CHEN 1. Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Qingdao 266071, China; 2. College of Fisheries and Life Science, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China Abstract: Based on the EST sequence from a hemocyte cDNA library, the cathepsin L cDNA of Exopalaemon carinicauda (EcCatL) was cloned by rapid amplification of cDNA ends (RACE). The EcCatL cDNA was 1136 bp in length, which contains an open reading frame (ORF) of 960 bp, encoding a 319 amino-acid polypeptide. Homology analysis revealed that the amino acid sequence of