dna测序对模板和引物的要求.pdf

南 京 医 科 大 学 学 报 第 卷第 期 00 0 ID 年 月 !#! $%’()*#!#*+(,%!-*%!%.%/ 0110 2 eeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeee 全自动 测序仪对测序模板和引物的要求 345677 893 刘 丰 李春林 苏 川 : : 南京医科大学分子生物学研究所 江苏 南京 ; : 0110= 关键词 测序反应 模板 引物 测序仪 ? @ A,%! A A,%! 中图分类号 文献标识码 文章编号 ? @ BCDE ? @ F ? @ 11CGH2ID;011010G1IDG1 测序仪是由美国应用生物系统公司 有一定量的起始模板浓度 而且不同的模板 其起始浓度 !F2CC,%! ;!F : ,%! 生产的全自动测序仪 它采用平板式凝胶测序系统 操作方便 又是不一样的 过低的模板浓度使得测序反应无法进行 过高 J : J A 灵活 因此 在参与人类基因组计划的测序仪中 占了 的模板浓度则会使测序反应停滞 J : :!F2CC J 绝大多数 测序仪分析的 样品 模板必须先经测序反 难测模板 J ,%! KK T2 应 即根据 的末端终止法原理 通过 以模板的碱 测序反应不是单纯的 反应 因此有些在 反应中 : *LMNOP : Q) )Q J Q) 基序列对应地将用 色荧光标记的 种双脱氧核糖核酸 能扩增的模板在测序反应中则无法进行 如模板 序列中 H H J ,%! 精确无误地接上 然后测序仪通过读取这 种 含重复序列 小卫星 鸟嘌呤胞嘧啶 含量 回文 ;RR%#Q : H ; U ;/ Z E1_U 的荧光信号获得待测样品的序列 笔者在实际工作中 序列等都属难测模板 用通用的测序试剂是无法进行的 对此 RR%#Q J : J 发现 测序结果的好坏并不是由测序仪的检测或其凝胶分离 公司另有专用的试剂盒 : !F J 系统即测序仪本身造成 而是由测序前所做的测序反应是否 :