佐剂发展史.doc

一种免疫效果确实的疫苗往往需要一种与之相匹配的佐剂才能更好地发挥疫苗抗感染的特性。近年来随着现代生物技术的进步,各种新型疫苗(乙肝亚单位疫苗、H IV疫苗及基因工程疫苗)的研究逐渐成为热点问题。其中佐剂的研究几乎决定了新型疫苗的诞生。虽然经典的铝胶佐剂成为美国食品与药品管理局( FAD)批准的唯一的人医用佐剂,但是很难满足现代各种新型疫苗的需要和发展。 目前国外已经试验的佐剂有100 多种,按照佐剂作用方式可分为:免疫调节作用(诱导抗原提呈细胞(APC)分泌不同的细胞因子,如γ干扰素( IFN-γ) 、白细胞介素2 ( L-2 ) 、α肿瘤坏死因子( TNF-α) 、白细胞介素4、5、10、13 ( L-4、5、10、13) 、抗原提呈作用(佐剂保持抗原构象的完整并提呈给适当的免疫效应细胞) 、诱导CD8+?细胞毒性T细胞(CTL )应答、靶向作用(佐剂激发APC摄取和传递抗原,进而向免疫效应细胞提呈抗原的能力)和抗原储存作用(将抗原短期或长期储存在注射部位免受肝脏清除)。根据佐剂的成分可分为矿物盐佐剂、油佐剂、微生物类产品、皂苷类和化学合成物质等五类。本文简单阐述了国外研究应用的佐剂。 1????????矿物盐佐剂(铝胶) 铝胶佐剂是以氢氧化铝或磷酸铝水合凝胶的形式,高效吸附水溶性抗原,缓慢释放不断刺激机体产生体液免疫。铝胶使用方便,成本低廉,安全无毒,是至今唯一被FDA批准用于人用疫苗的佐剂。 铝胶佐剂存在的主要问题是: ①主要激活Th2型免疫细胞,只诱导体液免疫应答,适用于以抗体保护为主的疾病疫苗; ②铝胶佐剂在注射部位缓慢释放抗原的效应较低,对很多抗原效果不确实。目前,人医主要用于白喉、破伤风、麻疹等疫苗,兽医主要用于猪、牛、禽等多杀性巴氏杆菌病、肉瘤梭菌、仔猪红痢、猪丹毒等细菌病的疫苗。 2????????油乳剂 最经典的油乳剂为弗氏完全佐剂( FCA)和弗氏不完全佐剂( F IA) 。FCA 是标准的既能诱导体液免疫又能诱导细胞免疫的佐剂。FCA可以诱导Th1型细胞因子,而F IA则只能诱导Th2型细胞因子。FCA和F IA的高度佐剂活性是其他佐剂难以比拟的,但是由于其配方中含有矿物油(含有致癌成分稠环芳烃) ,其F IA的致癌性在雄性Swiss小鼠中已经得到证实，因此至今没有被FDA批准为合法的佐剂。此外, 由于矿物油(Mineral oil,Marcol 52)很难被动物机体降解,与其配伍的乳化剂单磷酸脂质A (Arlacel A)抗原依赖性降解后释放出游离的脂肪酸。上述两种原因造成该佐剂在注射部位局部形成小结、肉芽肿,有些动物甚至会形成无菌性化脓性炎症反应。 国外SEPP IC公司制造出Montanide ISA 系列油佐剂,其专用乳化剂为Montanide ISA 80。按照欧洲药理学会的要求进行试验,该系列佐剂在小鼠或豚鼠皮下注射,没有发生严重的副反应。因此,欧盟批准该系列产品可以在所有食品动物上使用。 3????????微生物类产品 微生物(布氏杆菌、沙门氏菌和结核菌等)和微生物产物有较强的佐剂活性。FCA中结核菌细胞壁和来源于明尼苏达沙门氏菌R595株的脂多糖(LPS)就是商业开发比较成功的例子。后者现已经形成商品MPL,含有4～5个高度酰化的脂肪酸。再经过温和的酸碱水解后层析提纯为3D-MLA。目前,多项微生物和肿瘤抗原的后期临床试验正在进行中,但其在人医上的安全性已得到证实。 Detox复合剂是MPL 和枯草分枝杆菌细胞壁骨架(CWS)的复合物。加拿大已经批准Detox作为黑素瘤疫苗Melacinem的组分使用。海藻聚葡糖(Algal Glucan)来源于Euglena gracilic (D86-9株) ,经过甲醇和氯仿抽提,再用稀盐酸和无热源质生理盐水冲洗即可。其作用机理是聚葡糖封闭巨噬细胞上的β - 聚葡糖受体而刺激免疫活性。这种配基受体相互作用导致巨噬细胞激活而结构改变,促进抗原定位。霍乱全毒素(CT)是目前试验阶段粘膜免疫效果最好的佐剂,其免疫活性与ADP糖基化有关。CT与其他蛋白抗原配合使用则可以诱导极强的体液免疫和细胞免疫。霍乱类毒素(CTB) ,即CT缺失亚单位A而形成的类毒素,有运输抗原并促进定位的作用,但其口服和静脉注射效果不好。 4????????皂苷类 QuilA是从南美皂树(Quillaia saponaria Moli2na)树皮中提取的一种皂类。它与胆固醇、类脂和蛋白抗原一起被制成免疫刺激复合物( ISCOMs) 。Morein等于1984 年首次报道这种具有免疫增强效果的亚细胞结构的复合体。粗制的Quil A可以引起动物注射部位严重的副反应,精制后反应较轻。虽然单独使用Quil A 亦有与ISCOMs相似的作用,由于其有强烈的溶血作用,虽然作为食品添加剂已得到批准,