[农林牧渔]第4章 固相析出分离技术.ppt

第4章 固相析出分离技术 第4章 固相析出分离技术 沉淀法：在固相析出过程中，析出物为无定形固体时则称为沉淀法。 ? 4.1? 盐析法 概念：在高浓度中性盐存在的情况下，蛋白质等生物大分子在水溶液中的溶解度降低并沉淀析出的现象称为盐析。 一、盐析法的原理 (蛋白质) 二、盐析常用的盐  三、影响盐析的因素 四、盐析操作（以硫酸铵为例） （2）直接加固体硫酸铵 4.2? 有机溶剂沉淀法 2）有机溶剂能破坏蛋白质表面的水膜。 ? 缺点：①有机溶剂沉淀法易使蛋白质等生物大分子变性，操作需在低温下进行；②需要耗用大量有机溶剂，成本较高；③有机溶剂一般易燃易爆，所以贮存比较困难或麻烦。 有机溶剂的选择主要考虑以下几个方面的因素：①介电常数小，沉淀作用强。②对生物大分子的变性作用小。③毒性小，挥发性适中。④一般需能与水无限混溶。 进行有机溶剂沉淀时，欲使原溶液达到一定的溶剂浓度，需加入有机溶剂的量可通过下式计算 一般在有机溶剂沉淀时中性盐浓度以0.01～0.05mol/L为好，常用的中性盐为醋酸钠、醋酸铵、氯化钠等。  4.3? 其他沉淀法 ?? ③ 选择性的酸碱变性。 ? 常用的有机多聚物：不同分子量的聚乙二醇（PEG）、聚乙烯吡咯烷酮和葡聚糖等，应用较多的是相对分子质量6000～20 000的PEG 。 ?  几种主要沉淀方法比较 4.4 结晶 结晶是使溶质以晶态从溶液中析出的过程。晶态就是外观形状一定、内部的分子（或原子、离子）在三维空间进行有规则的排列而产生的物质存在状态。由于只有同类分子或离子才能排列成晶体，所以通过结晶，溶液中的大部分杂质会留在母液中，使产品得到纯化。 一、基本原理 当溶液处于过饱和状态时，分子间的分散或排斥作用小于分子间的相互吸引作用，便于开始形成沉淀或结晶。操作上注意①要调整溶液，使之缓慢地趋向于过饱和点。②调整溶液的性质和环境条件，使尽可能多的溶质分子相互接触，形成结晶。 二、结晶的过程 将一种溶质放入溶剂中，必然发生两个过程：①固体的溶解，即溶质分子扩散进入溶液内部；②溶质的沉积，即溶质分子从液体中扩散到固体表面。当溶液浓度超过饱和浓度时，固体的溶解速度小于沉积速度，这时才可能有晶体析出。最先析出的微小颗粒是以后结晶的中心，称为晶核。晶核形成以后，还需要靠扩散作用继续成长为晶体。 解析法是向溶液中加入某些物质，使溶质的溶解度降低，形成过饱和溶液而结晶析出。这些物质被称为抗溶剂或沉淀剂，它们可以是固体，也可以是液体或气体。解析法常用固体氯化钠作为抗溶剂使溶液中的溶质尽可能地结晶出来，这种结晶方法称为盐析结晶法。解析法还常采用向水溶液中加入一定量亲水的有机溶剂，如甲醇、乙醇、丙酮等，降低溶质的溶解度，使溶质结晶析出，这种结晶方法称为有机溶剂结晶法。 ①温度一定时，当过饱和度超过某一值时，成核的速度随饱和度的增加而加快，但过饱和度太高时，溶液的粘度会显著增大，分子运动减慢，成核速度反而减小。 ②成核的速度随温度升高而升高，但达到最大值后，温度再升高，速度下降。 ③成核速度和溶质种类有关，阳离子或阴离子的化合价增加，越不容易形成晶核，在相同的化合价下，含结晶水越多，越不容易成核。对于有机物质，结构越复杂，分子量越大，成核速度越慢。 诱导晶核形成的常用方法 实验室结晶操作时，常使用玻璃棒轻轻刮擦玻璃容器的内壁，刮擦时产生玻璃微粒可作为异种的晶核。另外，玻璃棒沾有溶液后暴露于空气中，很容易蒸发形成一层薄薄的结晶，再浸入溶液中便成为同种晶核。同时用玻璃棒边刮擦边缓慢地搅动也可以帮助溶质分子在晶核上定向排列，促成晶体的生长。 在过饱和溶液中已有晶核形成或加入晶种后，以过饱和度为推动力，晶核或晶种将长大，这种现象称为晶体生长。晶体生长速度也是影响晶体产品粒度大小的一个重要因素。如果晶核形成速度大大超过晶体生长速度，则过饱和度主要用来生成新的晶核，因而得到细小的晶体，甚至无定形；如果晶体生长速度超过晶核形成速度，则得到粗大而均匀的晶体。 影响晶体生长速度的因素主要有杂质、过饱和度、温度、搅拌速度等。杂质的存在对晶体生长有很大的影响，有的杂质能完全制止晶体的生长；有的则能促进生长。 过饱和度增高一般会使结晶速度增大，但同时黏度增加，结晶速度受阻。 温度升高有利于扩散，因而结晶速度增快。经验还表明，温度对晶体生长速度的影响要比成核速度显著，所以在低温下结晶得到的晶体较细小。 搅拌能促进扩散，加快晶体生长，同时也能加速晶核形成，搅拌越剧烈，晶体越细。 溶液的浓度应根据工艺和具体情况实验确定。一般地说，生物大分子的浓度控制在3％～5％比较适宜，小分子物质如氨基酸浓度可适当增大。 大多数生物分子需要有一定的纯度才能够结晶析出。一般来说，结晶