[自然科学]分子生物学4-2现代分子生物学的研究方法与技术.pptVIP

第四章　翻译——从mRNA到蛋白质 * 4.1 遗传密码和遗传信息的翻译系统 4.2 蛋白质合成的过程 4.3 蛋白质合成的干扰和抑制 4.4 蛋白质的运转机制 Chapter 4: Translation 4.2 蛋白质合成的过程 　4.2.1 氨基酸的活化转运 　4.2.2 核蛋白体循环 4.2.3 真核生物与原核生物蛋白质合成的异同 4.2.4 翻译后加工 4.2.1 氨基酸的活化转运 氨基酸的活化: 氨基酰tRNA合成酶来催化的。 活化： aa + ATP + E* 氨基酰-AMP-E + PPi 转移： 氨基酰-AMP-E + tRNA aa - tRNA+AMP +E 氨基酸的活化必需组分： 20种氨基酸 20种氨酰-tRNA合成酶 20种或更多的tRNA ATP，Mg2+ 4.2.2 核蛋白体循环 以原核生物中蛋白质合成为例，将核蛋白体循环人为地分为起始、肽链延长和终止三个阶段。 4.2.2.1 肽链的起始 4.2.2.2 肽链的延长 4.2.2.3 肽链的终止 4.2.2.1 肽链的起始 肽链的起始必需组分： mRNA N-甲酰甲硫氨酰-tRNA (fMet-tRNAfMet) mRNA上的起始密码子(AUG) 30S核糖体小亚基 50S核糖体大亚基 GTP，Mg2+ 起始因子(IF-1, IF-2, IF-3) 起始因子 (initiation factor, IF) 参与蛋白质起始复合物的形成。 IF-1：促进IF-2和IF-3的活化。 IF-2：促进fmet-tRNAfmet与30S小亚基结合的作用，并有依赖核糖体的GTP酶活。 IF-3：使30S亚基释放，辅助mRNA与小亚基结合，并阻止大小亚基重新聚合。 起始复合物的形成： (1) IF-3和核糖体30S rRNA结合 使16S RNA和mRNA的SD序列结合 a.使30S 保持游离 b.形成起始复合体 I (2) IF-2 + GTP + 氨酰甲硫氨酸 中间复合体。 (3) IF-1置换出 IF-3, 50S亚基可和30S亚基结合。 (4) 50S+30S 复合体III，释放IF-1, IF-2。 Initiation prokaryotes 4.2.2.2 肽链的延长 肽链的延长必需组分： 功能核糖体（起始复合物） AA-tRNA 延长因子(elongation factor, EF) GTP，Mg2+ 肽基转移酶 延长因子 (elongation factor, IF) EF-Tu：与氨酰-tRNA及GTP结合形成EF-Tu . GTP.AA-tRNA，将氨酰tRNA转入A位，但它不能识别fmet-tRNA。 EF-Ts：在GTP供能时，使EF-Tu.GDP转变为EF-Tu.GTP. EF-G：依赖于核糖体的GTPase，使GTP水解，并有移位酶作用。 肽链的延长具体过程包括： 进位 转肽 脱落 移位 以后肽链上每增加一个氨基酸残基，就按： ① 进位（新的氨基酸tRNA进入“A位”） ② 转肽（形成新的肽键） ③ 脱落（转肽后“P位”上的tRNA脱落） ④ 移位（核蛋白体挪动的同时，原处于“A位”带有肽链的tRNA随之转到“P位”） 4.2.2.3 肽链的终止 肽链的终止必需组分： ATP mRNA上的终止密码子 释放因子(RF-1, RF-2, RF-3) 终止因子 (termination factor, TF) 又称为释放因子(release factor, RF) 功能是识别mRNA上的终止密码子, 终止肽链的合成并释放出肽链。 RF-1:识别密码子UAA及UAG RF-2:UAA及UGA RF-3:结合GTP,并促进RF-1及RF-2与核糖体的结合。 参与原核生物蛋白质合成的一些因子 　　作用阶段 因子 作用 　　起动 　　IF １ 使带氨基酰的 tRNA与小亚基结合 　IF 2 同上，并具有 GTP酶活性 　IF 3 促进小亚基与 mRNA特异结合，在终止阶段促使已脱落的核蛋白体解离为亚基 　　延伸 FTu、 EFTs 促进氨基酰 tRNA进入核蛋白体