激光光镊技术在单细胞单分子科学中的应用研究-中国显微图像网.PDFVIP

维普资讯 90 《激光杂志2005年第26卷第6期 LASERJOURNAL(Vo1．26．No．6．2005) · 激光医学与医学(论文与临床报告)· 激光光镊技术在单细胞、单分子科学中的应用研究 朱 杰，孙润广 (陕西师范大学物理学与信息技术学院生物物理研究室，西安710062) 提要：首先阐明了单细胞、单分子分析与研究的学科价值和社会意义：强调了激光光镊技术的出现对促进 T．-、单细胞科学的发展的实 际贡献；介绍了光镊的物理原理和工作特点；着重总结了激光光镊技术在单分子、单细胞领域的具体应用情况，并结合详细的研究工作，对这一 技术的开发完善和应用发展给出了一些评述和建议：阐述了光镊技术在单细胞 、单分子研究中的潜在地位和巨大的发展前景。 关键词：激光光镊；单细胞；单分子 中图分类号：Q633 文献标识码：A 文章编号：0253—2743(2005)06一OO9O一02 维普资讯 《激光杂志2005年第26卷第6期 LASERJOURNAL(Vo1．26．No．6．2005) 91 2．4 促进细胞融合 Bems等l，首次将光镊同激光微束(光刀)偶联起来，实现 了激光诱导细胞融合。他们用此方法研究了精子的游动并对细 胞有丝分裂中后期的染色体进行切割，对染色体的运动、分布进 体行了深入的研究。seeg盯等l【J利用光镊和光刀偶联实现了染色 的精细切割和高效收集及植物原生质的融合，并研究了细胞 内应力的作用及某些微重力效应。Ashkin[16}用三光束法对红血 细胞和聚苯乙烯球实现了接触后再分离。Clement等 ”【利用光 镊捕获特定精子后通过光穿孔送到卵周隙协助授精，结果证明 紫外激光微束和光镊捕获结合可成功地用于显微授精，这为解 决医学上的难题带来了曙光。 3 在 单分 子研 究 中的 府 用 在生命过程中，生物大分子的位移和速度，受力的大小 与方向，彼此间的结合与分离等运动学和动力学特性与它们 的结构和功能密切相关，因而力学量成为表征其特性和生物 过程的重要参量。作为一种重要的操纵技术 ，光镊技术在单 分子科学中占有重要地位。在单分子实验 中通常把生物分 子样品联结到介质小球上 ，通过用光镊俘获和操纵介质小球 来达到操纵样品的目的。利用光镊可实时观察单细胞骨架 结构的变化，定量监测细胞骨架的张力和弹性 【J：对染色体 进行捕捉，对细胞内部微粒进行精确定位 ：光镊技术还可用 来进行基因导入 3J。利用光镊还可研究分子马达的运动机 制、DNA分子的非线性弹性性质和 DNA聚合链特征性运动 对生物材料的粘弹性影响等 4l。在介质小球上结合不同的 生物分子，用不同的操作模式可实现对生物大分子的精细操 作、描述单分子间的结合状况，进而在分子水平上了解生物 分子的特异识别和生命调控功能。光镊技术的发展使得生 命活动在单分子和单细胞层面上的研究成为可能。 3．1 研究生物大分子的力学特性 生物大分子通常被束缚在直径约 1a／m的聚苯乙烯小球 上，而介质小球则通过光镊技术被俘获在光阱中。通过光镊 对单分子进行扭转、弯曲、拉伸操作来研究其力学特性。首 先将光镊技术引入分子力定量测量的是 Block等人 l，他们 将大肠杆菌的鞭毛固定在一个盖片上，再用光镊移动病菌的 细胞体，测量鞭毛与其根部连接处的扭力，进而得到了细菌 尾部鞭毛的弹性。si肼mnsl9用此技术研究了单个肌肉纤维 所产生的力。Sehafer等 l9首先将 RNAP固定在溶液中的表 面上 ，转录过程中，RNAP牵引DNA链 ，进而带动束缚在 DNA 上的介质小球向表面运动。Bustmante等[2oJ研究了单个 DNA 的非线性弹性拉伸应变的静力学特性，为研究DNA单分子 构型提供了进一步的实验基础。在中性溶液中，Fenala等[21J 用光镊对胶原蛋白1I进行了拉伸实验，并阐述了胶原蛋白分 子的力学特性。Leake等 J用双光镊法对骨骼肌及心肌肌联 蛋白分子的单分子