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厌氧菌的药敏方法介绍 一、受试菌的准备 一、受试菌的准备 1.将受试菌纯菌接种在厌氧菌血平皿上（一般使用GAM、BHI等），厌氧培养48h（厌氧手套箱中）,厌氧罐中72h。 3. 调节浓度到0.5号McFaland管中(相当于1.5×108CFu/ml), 若用试管稀释法测MIC,则上述管应10倍稀释2次,终浓度为106 CFu /ml即可使用,若为琼脂稀释法则不宜稀释,因为点种菌一般为1-3?l,其浓度仍为1.5 × 105CFu/ml左右。 4. 也可将菌的混悬液经厌氧培养4-6h（生长缓慢菌应培养12h），这时应注意菌的浓度，如仍在0.5号MF管内就不作处理, 超过此浓度宜作稀释后再使用。 5.每次药敏试验受试菌中应注意加入标准菌株作为质控. ①B.fragilis脆弱类杆菌(ATCC 25285或NCTC 9343) 二、抗生素的稀释和准备 1.准确称取抗生素(我们一般称取2.56g,加DW或其它液体4ml)，以对倍稀释法稀释成系列浓度2560、1280、640、320、160、80、40、20、10、5、2.5。抗生素量的选择可据上表敏感范围作中点向上、向下各稀释5个浓度。 3.一般宜选择表1中1-2种抗生素作为质控抗生素使用。 三、培养基的准备 1.使用布氏琼脂或GAM培养基 布氏琼脂(胰酪胨10g、 动物组织蛋白酶消化物10g、酵母粉2g、葡萄糖1g、氯化纳5g、亚硫酸纳（NaHSO3)0.1g、0.5%氯化血红素1ml、1%vitk1 0.1ml、DW1000ml.pH7.0-7.2 121℃ 15min高压灭菌。 四、抗生素的MIC试验 1.取上述准备好的受试菌液0.5ml，加入灭菌瓷板槽孔中,按顺序并作标记。 五、结果观察 1. 两块无抗生素平板，需氧平板无菌生长,而厌氧平板受试菌株全部生长。 关检厌氧菌药敏的K-B（纸片法） 说明：厌氧菌的药敏试验一般不宜使 用K-B法做敏感试验，提倡使用试管或琼脂稀释法做药敏，有时为了临床需要也做K-B法, 提供临床参考。 方 法 1.纸片的制备：选用国产新华Ⅰ号滤纸， 使用打孔机制备成为6mm纸片。 4.每100张制备好的滤纸片平铺在平皿上，加抗生素溶液0.5ml使其浸均，再在37℃烘干，每10片装入无菌小瓶中，用无菌橡皮塞盖紧于-20℃以下冰箱中保存。 5.每批纸片用标准菌株检测，其抑菌环在规定范围内，每批纸片对同一标准菌株抑菌环大小差别≤2mm说明抗菌纸片合格。 6.大致判断标准一般其抗菌环直径≤15为不敏感，15-20mm为中介, ≥22多为敏感。 * * （琼脂稀释法） 熊 德 鑫 解放军304医院创伤研究室 北京 100037 二、抗生素的稀释和准备 三、培养基的准备 四、抗生素的MIC试验 五、结果观察 厌氧菌的药敏方法介绍 2.取一定量(3-5个菌落)混悬在不抑制厌氧菌生长的透明肉汤中如硫乙醇酸纳肉汤或布氏菌肉汤等。 ②B.thetaiotaomicron多形类杆菌(ATCC 29741) ③C.perfringens产气荚膜梭菌(AATCC 13124) ④E.lentum迟缓真杆菌(ATCC 43055) 6.琼脂稀释法中质控菌株MIC值(?g/ml)允许范围（表1） 表1 质控菌株MIC允许范围(ug/ml青霉素u/ml) 抗生素* 脆弱类杆菌* ATCC 25285 多形类杆菌* ATCC 29741 迟缓真杆菌* ATCC 43055 产气荚膜梭菌** ATCC 13124 羧苄青霉素 （carbinicillin） ?16-64 ?16-64 ?8-16 ?0.25-1 头孢哌硐 （cefoperazone） ?32-64(128) 32-128? ?32-128 ?0.125-0.5 头孢氨噻肟 （cefotaxime） ?8-32 16-64? ?64-256 ?0.6363-0.25 氯霉素 (chlorampheninol) 2-8 ? 4-16 ? NO ? ?2-8 ? 氯林可霉素 （clindamycin） 0.5-0.2 ?2-8 ?0.06-0.25 ?0.031-0.125 甲哨唑 （metronidazole） ?0.25-1 0.5-2? ?0.5-2 ?0.125-0.5 青霉素G （penicilling） ?16-64(8-32) ?16-64(8-32) ?NO ?0.063-0.25 阿莫西林/棒酸 （Amoxicillin/ Clavulanic acid) ?0.25-1 ?0.5-2 ?NO ?0.25-1 抗生素 脆弱类杆菌 ATCC 25285 多形类杆菌 ATCC 29741 迟缓