产γ-氨基丁酸菌株的分离和选育.pdfVIP

产 ·氨基丁酸菌株的分离和选育 冯宇，张颖，潘超强，任雪，赵文怡，高年发 (工业微生物教育部重点实验室，天津科技大学生物工程学院，天津 ，300457) 摘 要 从市售 的酸菜 中分离得到 1支 氨基丁酸产量为 16g／L的菌株 F。经形态学观察 、生理生化试验和 16SrDNA序列测定对 比，最终确定菌株 F为短乳杆菌，并命名为LactobacillusbrevisTCCC13007，经硫酸二 乙酯和 氯化锂混合诱变 17rain后 ，正突变率为30％，致死率大于95％。采用含有50g／LGABA的GYP平板初筛，发酵 复筛后 ，得到 1支产量为24g／L的菌株 F1。连续传代8次，产量稳定。比出发菌株产量提高了50％。 关键词 一氨基丁酸 ，短乳杆菌，鉴定，诱变 一 氨基丁酸 (GABA)也称氨酪酸 ，是一种非蛋白 1 枕料与方法 质组成的天然氨基酸，是 目前研究得较为深入的一种 重要的抑制性神经递质，它参与多种代谢活动，具有 1．1 材料 降血压 ，调节心律失常，改善睡眠、抗焦虑改善脂质代 1．1．1 菌种及其来源 谢 ，防止动脉硬化等功效 ，因此受到越来越多 的科学 取市场中的酸菜、泡菜 、酸乳等，适当稀释后倾注 工作者的关注 。 于含有 CaCO 的GYP平板中，30℃培养 2d，将有较 GABA的合成方法主要有化学合成和生物合成 大溶钙圈的菌株穿刺在 GYP的高层琼脂培养基中， 2种。化学法速度快 ，得率高，但成本高 ，安全性差 。 4oC于冰箱保存 ，备用。 生物法成本低。原以大肠杆菌作为合成 GABA的菌 1．1．2 培养基 株 ，但其存在安全卫生方面的隐患 。乳酸菌中同 乳酸菌分离培养基 GYP(g／L)：葡萄糖 10，酵母 样拥有谷氨酸脱羧酶，可以催化底物谷氨酸钠来合成 提取物 10，蛋 白胨 10，NaC12，醋酸钠 2，MnSO ·HO GABA，而且被普遍应用于食 品医药行业 当中，比较 0．05，MgSO4·7H2O0．2，CaCO 5，琼脂 20，pH 自然。 安全 引。 种子培养基 MRS(g／L)：蛋白胨 l0，牛肉提取物 国内外对 于 GABA的研究开展得 比较广泛 ，日 10，酵母提取物 5，葡萄糖 5，乙酸钠 5，柠檬酸二胺 本主要生产富有 GABA的食 品，如番茄 、茶叶、糙米 2，MnSO4 ‘H2O0．05，MgSO4 ·7H200．2，吐温 801 等等。日本科学家以米糠作为原料 ，并添加适量谷氨 mL，蒸馏水 1000mL，pH 自然 。 酸钠，发酵3d，最终产量可以达到60g／L。 发酵培养基 GYP(g／L)：葡萄糖 l0，酵母提取物 我国江南大学和福建安溪茶叶生物科技有限公 l0，蛋 白胨 l0，氯化钠 2，醋酸钠 2，MnSO ·H：O 司等合作 的项 目—— 以谷氨酸为原料进行 的GABA 0．05，MgSO4 ·7H2O0．2，MSG 50，pH 5．0。 工业化生产已经获得成功 ，并达到国际领先水平。该 诱变初筛培养基 GYP(g／L)：葡萄糖 l0，酵母提 项 目在年产 300t规模的装置上 ，GABA终产量可达 取物 10，蛋 白胨 10，NaC12，醋酸钠 2，MnSO ·H。O 到每20g／L，回收率和纯度均可达到 80％以上。由 0．05，MgSO4·7H200．2，GABA50，琼脂 20，pH 自然。 此可见对于 GABA的研究开发拥有很强 的现实意义 1．2 方法 和广阔前景 。 1．2．1 发酵方法