禽白血病综述及PCR技术探讨演示幻灯.pptVIP

动物疫病监测培训班 禽白血病流行病学及防控 1 荧光PCR检测技术及应用 2 POCKIT现场PCR检验系统 3 内容提要 核酸自动提取仪的应用 4 第一章 禽白血病流行病学及防控 禽白血病毒（ALV）是一种反转录病毒，类似于人的艾滋病毒。 传播方式：垂直传播、横向感染、昆虫、针头、活疫苗污染。 ALV分类（亚群）：A，B，C，D，E，J，K。近两年J亚群在临床上的分离率较高。 净化鸡群，主要指的是净化外源性病毒。所谓外源性病毒，是指不会通过染色体传递的ALV，主要包括A、B、J亚型，这些亚型的病毒致病力较强。 禽白血病流行病学概述 禽白血病 囊膜糖蛋白（gp85） 它是区别亚群的抗原。常见的A、B和J亚群ALV感染后的鸡，可用对应的抗体检测试剂盒检测选。 主要衣壳蛋白（群特异性抗原，p27） 不同亚型间区别不明显，它可用来初步检测ALV，如ELISA检测。但无法区别致病性外源性病毒和无致病性内源性病毒。 ALV的主要抗原蛋白 鸡群的临床和病理表现 生长迟缓、产蛋下降、不同脏器组织的肿瘤、腺胃炎、腺胃肿大、骨硬化等。 肿瘤性死亡：最主要的危害。 1.ALV的A、B、C、D亚群主要引起淋巴细胞瘤为主，有时可见血管瘤。 2.ALV的J亚群主要引起髓样细胞瘤。 生产性能下降：其中对蛋鸡危害最大。 免疫抑制：免疫后抗体效价低。 ALV的危害 严格控制种源 不定期监控和检疫进口种鸡 监控本地种鸡群的感染状态 本地品系鸡原种鸡群的净化 种鸡场ALV检测方法 1.采取刚出壳雏鸡胎粪或肛拭子做p27检测。 2.开产初期（25周龄）做2-3次采血，接种Df1细胞， 培养9天。应用p27抗原ELISA试剂盒+间接免疫荧光方法联合检测病毒。 3.种蛋蛋清做p27检测。 4.SPF鸡胚中卵黄抗体检测，卵黄抗体基本可代表血清抗体状态。 ALV的防控措施 检测种鸡所产种蛋中p27抗原阳性率。 1.必须保证检测的蛋样≥100只。 2.需在开产及高峰，孵化前采集。 3.阳性率＞1%即为高风险。不合格。 4.样品抽取的随机性。 ALV感染风险评估体系 1.血清学检测 优点：方法简单、可大量操作。 缺点：无法鉴别诊断，有时会与E亚群交叉反应。 用途：流调、净化状态判定、SPF鸡群的感染情况 试剂盒选用：IDEXX 2.ALV-p27抗原检测 优点：方法简单、可大量操作。 缺点：无法区别内源外源病毒，会导致假阳性。 用途：出壳雏鸡肛拭子检测。 试剂盒：IDEXX、中监所。 ALV检测方法 2. 3.核酸检测法 用PCR（RT-PCR）结合特异性核酸探针做分子杂交，直接检测样品中有无A、B、J群的病毒核酸。 优点：直接检测病毒，灵敏度高，特性性高。 缺点：操作人员需要有一定的操作基础，无法得到病毒。 如何选用适合的检测试剂盒？ 用不同滴度的抗原盲测，选出最敏感的。 同一品牌不同批次的试剂盒进行筛选。 ALV检测方法 分为两类产品 1、禽病诊断试剂盒 禽流感试剂盒：通用型、H5亚型、H7亚型、H9亚型。 新城疫诊断试剂盒。 2、猪病诊断试剂盒 口蹄疫通用型、蓝耳病通用型、高致病性蓝耳病、猪瘟、猪圆环2型、伪狂犬试剂盒。 凯杰生物工程公司产品 第三章 POCKIT现场PCR检验系统 产品特点 chanpin 1、便携性高 2、操作简单 3、反应时间短 4、灵敏度高 5、投入成本低 操作简单、判读结果直观 POCKIT产品与传统PCR的比较 POKIT 传统PCR 操作时间 1.5小时 3-5小时 设备所需空间 办公室或者简易 实验室 较大的独立空间 PCR产物 污染问题 无 风险较高 人员素质需求 看说明书即可操作 需具备分子 生物学知识 * *