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《化学通报》在线预览版 羰基咪唑法固定化pH梯度毛细管等电聚焦电泳用于蛋白质分离 * 谢 瑶 耿利娜 屈 锋 罗爱芹 邓玉林 (北京理工大学 生命科学与技术学院 北京100081) 摘 要 本文以 N, N ′-羰基二咪唑作为连接臂，将两性电解质（CAs ）与毛细管内壁进行偶联。在电场作用 下，CAs 在毛细管内按照等电点次序依次分开，再通过与羰基二咪唑的化学键合，形成固定化 pH 梯度。该方法 操作简单，适用于两步法毛细管等电聚焦分离蛋白质等两性生物大分子。考察了对血红蛋白、牛血清白蛋白及胃 蛋白酶三种蛋白质混合样品的分离，证明了该方法可行。 关键词 固定化pH 梯度 N, N ′-羰基二咪唑 毛细管等电聚焦 蛋白分离 The Method of Immobilized pH Gradient of CIEF used in Protein Separation Xie Yao , Geng Lina , Qu Feng , Luo Aiqin , Deng Yulin* (School of Life Science and Technology, Beijing Institute of Technology, Beijing 100081) Abstract An immobilized pH gradient method had been developed for proteins separation by two-step capillary isoelectric focusing based on chemical bonding. The double functional reagent, N,N ′-carboryldiimidazole was introduced in the capillary as a linkage in the immobilization reactions. Moreover, the commercial ampholytes (CAs) were distributed according to their pI values in the condition of electric field, and then connected with N,N ′-carboryldiimidazole by chemical bonding to realize the immobilized pH gradient in capillary. A test sample containing a protein mixture of hemoglobin (Hb), bovine serum albumin （BSA ）and pepsin was separated by using this method. Keywords Immobilized pH gradient, N,N ′-Carboryldiimidazole, Capillary isoelectric focusing, Protein separation 毛细管等电聚焦（capillary isoelectric focusing, CIEF ）是一种对蛋白质及多肽等生物分子具有高分辨率 的电泳技术。其基本原理是根据生物大分子等电点的不同进行分离，即具有不同等电点的样品分子在电泳 过程中迁移至其各自等电点的位置，进而得到分离。Hjerten 等[1]首次报道了毛细管等电聚焦方法后，它已 被广泛应用于多肽及蛋白质等两性大分子的的分离[2~5] 。通常，在自由溶液进行等电聚焦时，样品中 CAs 的引入会带来检