L硒甲基硒代半胱氨酸检验方法.doc

食品添加剂 L-硒-甲基硒代半胱氨酸 生产工艺 以α-乙酰氨基丙烯酸甲酯和甲硒醇钠为主要原料，经加成、酶法拆分制得食品添加剂L-硒-甲基硒代半胱氨酸（简称L-SeMC）。 性状 本品外观为白色粉末，具蒜样气味。本品易溶于水，微溶于甲醇，熔点174-176°C（分解）。 技术要求： 项 目 指 标 检验方法 含量（以L-SeMC计），w/% ≥ 96.00 附录A中A.1 比旋光度（水溶液） -10～-15 2010版中国药典二部附录Ⅵ E（旋光度测定法） 砷（As），mg/kg ≤ 2 GB/T 5009. 76-2003中第二种方法 重金属（以Pb计）， mg/kg ≤ 10 GB/T 5009. 74-2003 水分， w/% ≤ 1.5 2010版中国药典一部附录Ⅸ H（水分测定法，第三法-减压干燥法） pH（1%水溶液） 5.0～7.0 2010版药典二部附录Ⅵ H（pH值测定法） “精密称定”系指称取重量应准至所取重量的千分之一 检验方法 A.1 L-硒-甲基硒代半胱氨酸含量（以L-SeMC计）的测定 A.1.1 方法原理 采用高效液相色谱法测定，用紫外吸收检测器检测，外标法定量计算样品中L-硒-甲基硒代半胱氨酸的含量。 A.1.2 试剂和材料 A.1.2.1 L-硒-甲基硒代半胱氨酸对照品，纯度大于98%。 A.1.2.2甲醇，色谱纯。 A.1.2.3磷酸，分析纯。 A.1.3 仪器和设备 A.1.3.1 高效液相色谱仪：带有紫外检测器。 A.1.3.2 色谱柱：长为300mm，内径为4.6mm的不锈钢柱，固定相为C4、粒径5μm。 A.1.4 色谱分析条件 A.1.4.1 流动相：水溶液：甲醇=95：5（v:v），水溶液配制：每3000mL水中加入约1mL浓磷酸，调节pH为2.50。 A.1.4.2 流量：1mL/min。 A.1.4.3 检测波长：235nm。 A.1.4.4 柱温：25℃ A.1.4.5 进样量：20μL。 A.1.5 对照品溶液的配制 精密称取对照品10mg，置50mL容量瓶中，用水溶解，定容至50mL，用移液管精密吸取该溶液2mL，用流动相稀释至10mL，摇匀，用0.45μm滤膜过滤，得对照品溶液。 A.1.6 供试品溶液的配制 精密称取供试品10mg，置50mL容量瓶中，用水溶解，定容至50mL，用移液管精密吸取该溶液2mL，用流动相稀释至10mL，摇匀，用0.45μm滤膜过滤，得供试品溶液。 A.1.7分析步骤 A.1.7.1 系统适用性试验 在A.1.4规定的色谱分析条件下，理论塔板数按L-硒-甲基硒代半胱氨酸计算不应低于3000，L-硒-甲基硒代半胱氨酸与相邻杂质峰间的分离度应符合要求。 A.1.7.2 测定 精密吸取供试品溶液20(L，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取对照品溶液20(L，同法测定，按外标法以峰面积计算供试品中的L-硒-甲基硒代半胱氨酸含量。 A.1.8 结果计算 按下式计算L-硒-甲基硒代半胱氨酸的百分含量（W%），取两次测定结果的平均值，要求两次平行测定的结果偏差不大于0.3%。 A——供试品L-硒-甲基硒代半胱氨酸峰面积数值； As——对照品L-硒-甲基硒代半胱氨酸峰面积数值。 2、理论塔板高度和理论塔板数 　　理论塔板高度（theoretical plate height） H 表示：为使组分在柱内两相间达到一次分配平衡所需要的柱长。　　理论塔板数（number of theoretical plate） n 表示：组分流过色谱柱时，在两相间进行平衡分配的总次数。 　　当色谱柱长为L时，则它的理论塔板数n为：　　 N=L/H 或H=L/N　　由此可见，当色谱柱长L固定时，n值越大，或H值越小，柱效率越高，分离能力越强。n和H可以等效地用来描述柱效率。　　由塔板理论可导出理论塔板数n的计算公式为： 　　式中，保留时间和峰宽度的单位（cm和s）要一致，计算结果取两位有效数字。 　　3、有效理论塔板高度和有效理论塔板数 　　在实际应用中，提出了将除外的有效理论塔板数作为柱效能指标。其计算公式为： 则： 　　4、有效理论塔板数与容量因子的关系 上式说明了，值小，就明显地小于n值，值越大，就越接近n值。应当指出，在相同条件下，用不同的值的组分测出的柱效率是不同的。 1