6_原生质体融合育种教学教材演示幻灯片.pptVIP

* * * * * * * * 应用实例二 2002年在《Nature Biotechnology》上发表的另一例基因组改组的实例是乳酸杆菌耐酸菌株的选育。 通过五轮循环原生质体融合得到的新菌株适合在出发菌株不能生长的低pH值 （pH3.5）培养环境中生长和分泌乳酸，因而大大提高了乳酸杆菌合成乳酸的能力。 课堂活动 激光诱变育种 微波 离子束诱变、离子注入 航天 体外随机引物重组 外显子改组 酶法体外随机-定位诱变 合成改组 截断状模板重组延伸 退火低核苷酸基因重排 非依赖序列同源性的重组法 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * (1)过滤法 根据细胞大小，选用孔径略小于细胞的砂芯漏斗，过滤。 原生质体由于外层细胞膜柔软可变形，可以由比它小的微孔中穿过，而未酶解细胞或细胞团却不能。 (2)密度梯度离心法 用蔗糖或氯化铯等制成浓度（密度）梯度溶液，由于密度差别，经离心后原生质体漂浮于上部，未酶解细胞和细胞碎片沉于溶液下部。 原生质体 细胞碎片、未酶解细胞 (3)界面法 原理：选两种不同浓度的溶液，其中一种溶液密度大于原生质体的密度，另一种溶液小于原生质体的密度。离心后原生质体就集中在两层液面交界处而得到纯化。 原生质体 13%甘露醇溶液 25%蔗糖溶液 (4)漂浮法 适用于一些细胞较大的微生物。