第三章柱色谱.ppt

第一节 柱色谱的原理 一、柱色谱的分离原理 柱色谱法是指将待分离混合物均匀地加在装有固定相的柱子（玻璃或金属制成）中，再加适当的溶剂（称洗脱剂）冲洗，由于试样中各组分在两相中的分配不同，在柱中随流动相移动的速度不同，通过分段定量收集洗脱液而使各组分得到分离。 第一节 柱色谱的原理 二、柱色谱的分离参数 1、分配系数 2、柱色谱流出曲线 色谱流出曲线的意义： 指明样品的组成情况和提供样品中单组份的最少个数； 说明色谱柱的分离情况：柱效，选择性和分离度 提供单组分的定性和定量依据 第一节 柱色谱的原理 吸附剂的种类和性质 吸附剂的种类和性质 吸附剂的性质 吸附剂的性质 吸附剂的种类和性质 吸附剂的性质 吸附剂的种类和性质 吸附剂的性质 色谱柱的选择 抑制器的主要作用： 安装在电导池之前； 提高待测离子的电导率：提高灵敏度； Na+,Cl- → H+,Cl- 降低背景电导(淋洗液) : 减少噪音。 Na+, HCO3- → H2CO3 Na+, OH- → H2O 吸附性和筛选性原理相结合的分离材料。 1．原理 吸附实质：为一种物体高度分散或表面分子受作用力不均等而产生的表面吸附现象，这种吸附性能是由于范德华引力或生成氢键的结果。 同时由于大孔吸附树脂的多孔结构使其对分子大小不同的物质具有筛选作用。 有机化合物根据吸附力的不同及分子量的大小，在大孔吸附树脂上经一定溶剂洗脱而达到分离、纯化、除杂、浓缩等不同目的。 柱色谱 已经了解柱色谱的各种分离方式的原理、适用分析对象及选择原则。 最主要的两种柱色谱。 了解气相色谱法的优点及适用范围；理解固定相及气相色谱操作条件选择的原则；气相色谱的定性与定量分析方法。 了解高效液相色谱法的优点及适用范围；高效液相色谱法的分离模式。 高效液相色谱法和气相色谱法的比较。 5、离子色谱(IC)和离子对色谱法（IPC） 1）离子色谱 由于流动相都是强电解质，其电导率比待测离子约高2个数量级，这种强背景电导会完全掩盖待测离子信号。通过分离柱后的样品再经过抑制柱，高背景电导的流动相转变为低背景电导，从而用电导检测器检测各种离子的含量。 该法的缺点为：抑制柱要定期再生、谱峰在经抑制柱后会展宽，降低分离度。 离子色谱 离子色谱 抑制器的作用 离子色谱 思考：IC分离中，何为抑制柱？分析阴离子时，抑制柱中应填充何种离子交换树脂？ 离子色谱 电化学抑制器的工作原理((阴离子) 离子色谱 2）离子交换色谱柱的应用 （1）无机的阴阳离子 阴离子：F，Cl，NO3, SO4；阳离子：Li，Na, K, NH4等 （2）小分子的极性化合物： 有机酸：甲酸，乙酸，丙酸，柠檬酸，草酸等 有机胺：甲胺，乙胺，乙醇胺，三甲胺等 （3）在强碱性溶液中成离子状态 （a）糖、糖醇、醇：pKa在12-14之间的弱酸，在10-200 mmol的NaOH溶液中全部离子形式存在 （b）氨基酸：两性离子，在强碱介质中可以形成离子 离子交换色谱 离子交换分离机理 离子交换色谱 价态的影响 离子交换色谱 离子半径的影响 离子交换色谱 极化程度的影响 离子交换色谱 分离阴离子 离子交换色谱 分离阳离子 离子交换色谱 3）离子排斥色谱法的分离机理： 1.Donnan排斥作用－Donnan膜的负电荷层排斥完全离解的离子型化合物，仅允许未离解的化合物通过 2.吸附－保留时间有机酸的烷基键的长度有关。通常烷基键越长，其保留时间也越长。 3. 空间排阻－与有机酸的分子量大小及交换树脂的交联度有关 离子色谱 离子排斥法分离机理 离子色谱 离子排斥法分离有机酸 离子色谱 4）离子对色谱法 离子对色谱主要用来分离强极性有机酸和有机碱。将与待测物离子A电荷相反的离子B（称为对离子或反离子）加入到流动相（常为有机相）中，使待测离子A与离子B形成离子对AB，该AB离子对的性质与A离子或B离子的性质不同，即间接改变了待测离子的保留特性。 思考：有一强极性有机酸混合物，若用离子对色谱法分离，请问在流动相中应加入阴离子还是阳离子来开成离子对？ 离子对色谱 反相离子对（流动相离子色谱）分离机理 离子对色谱 反相离子对的分离机理： 1.生成离子对－待测离子与离子对试剂生成中性““离子对”分布于固定相与流动相之间，其分离类似传统的反相分离 2.动态离子交换－离子对试剂的疏水部分吸附于固定相形成动态的离子交换表面，其分离机理类似于离子交换。 3.离子间相互作用－除包括以上两种分离机理和固定相表面双电层结构的分离机理。 离子对色谱 凝胶柱色谱 四、凝胶柱色谱法 尺寸排阻色谱 1. 分离原理：凝胶内有一定大小的空穴，分子体积大的待测物不能渗入孔穴中而被排阻，较早地被洗出来，小分子则完全渗透。 凝胶柱色谱 2．载体 在水中不溶、但可膨胀