讲解蛋白裂解液.doc

蛋白质的定位与蛋白质裂解液的选择：全细胞：NP-40或RIPA细胞质（可溶）：Tris-HCl细胞质（细胞骨架）：Tris-Triton细胞膜：NP-40或RIPA细胞核：RIPA线粒体：RIPA RIPA裂解液配方 1ml RIPA buffer contains 35μl proteinase inhibitor and 10μl phosphatase inhibitor RIPA buffer 最终浓度 1M Tris-HCl (pH7.5) 5 ml 50mM NaCl 0.87g 0.15 M Na-deoxycholale 0.1g （0.1%） 0.5M EDTA(pH8.0) 0.8ml NaF 41 mg Nonidet P40 1 ml （1%） Aprotinin10μg/μl 100μl 10μg/ml 加水到 100ml Aprotinin 10μg/μl ；用10mM HEPES-KOH（PH8.0）溶解，备用。 Nonidet P-40简称NP-40，乙基苯基聚乙二醇,常用非离子性去垢剂。 Na-deoxycholale，脱氧胆酸钠，离子型去垢剂。离子型去垢剂主要作用有：裂解细胞；溶解蛋白，尤其是可以溶解一些难溶于水的蛋白，如膜蛋白等；很适合做WB，但在Co-IP中使用，需要谨慎。 亮抑霉肽（Leupeptin）：抑制丝氨酸蛋白酶包括胰