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液相色谱教程 (四)液相色谱柱基础知识 Waters 中国有限公司培训中心 液相色谱柱基础知识(1) Waters 中国有限公司培训中心 高效液相色谱柱简介 色谱柱是一根填满填料的管子 柱管的材料(塑料,玻璃,不锈钢…)和尺寸(内径,长短)不尽相同 管内的填料更是种类繁多,主要分为两大类 硅胶基质 聚合物基质 色谱柱的性能主要取决于填料的性质和填充技术 硅胶的结构 液相色谱填料的合成(1) 未键合的硅胶颗粒:孔表面 不同硅胶的制作过程 硅酸钠沉淀： (无定形颗粒) - μBondapak? 硅酸钠聚合成硅酸 (硅胶)，之后研磨成小颗粒 “SolGel”1过程: (球形颗粒) - Nova-Pak? 胶态硅球被熔融入色谱颗粒中 “SilGel”1过程: (球形颗粒) - Symmetry? 纯硅烷聚合形成色谱颗粒 硅胶颗粒技术的沿革 六十年代 薄膜无孔填料(表面积很低 50 m2/g -- Corasil) 七十年代 无定形多孔填料10 μm (Waters μBondapak?) 八十年代 球形填料5 μm (Waters Spherisorb? 及 Waters Nova-Pak?) 1995年 高纯球形填料 3-5 μm (Waters Symmetry) 2000年 无机硅胶和有机硅胶杂化填料 - Waters Xterra 3.5 μ,5 μ m 2004年 小颗粒(1.7 μ m)杂化填料 - Waters BEH （UPLC专用） 对色谱柱填料的了解(一) 平均颗粒度，颗粒度分布 颗粒度 颗粒度越小：柱效越高(传质好，涡流扩散小) 柱压越高(渗透性差) 颗粒分布 颗粒分布越宽:柱效低(渗透性差) 颗粒形状 球型:柱效高、重现性好、柱床结构均匀 无定型：柱床结构不均匀,流动相线性速度不均匀 谱带扩展 硅胶颗粒的形状 不规则形状 (Irregular) 大硅胶颗粒研磨，筛分 颗粒尺寸和表面积限制 球形（Spherical） 目前流行的分析填料 更好的性能，重现性 对色谱柱填料的了解(二) 键合相化学 影响化合物的分离度：α 不同键合相对不同种类的化合物分离不同 可能导致色谱的分离机理不同 如：C18、C8、CN 键合相色谱柱 以硅胶为基质，通过化学键合方式把碳十八、碳八、胺基等基团联在基质上，作为固定相 优点∶ 固定相稳定，不易流失 应用广泛，可使用多种溶剂 消除硅羟基的不良影响 缺点∶ pH值不能小于2(键合相水解) 同样填料，各种牌号色谱柱不尽相同 带有内嵌极性配体的色谱填料 对色谱柱填料的了解(三) 填料的端基封口 封口残余硅羟基 减少不可逆吸附或拖尾 增加碳含量（0.1% - 1%） 残基处理的效果 对色谱柱填料的了解(四) 含碳量 含碳量越高，k值越大（固定相传质效应增加） 高含碳量 有利于不易保留的化合物的分离 水解稳定性好，重现性好 有利于极性化合物的拖尾改善 低含碳量 有利于分析中性及碱性化合物 降低溶剂损耗 不同色谱柱的含碳量 色谱柱 C% k苊 (50/50的乙腈/水) Symmetry C18 19 17 Zorbax ODS 17 15.7 LiChrosorb RP-18 15 10.3 Symmetry C8 12 12.5 Resolve C-18 12 12.4 Ultrasphere ODS 11 11.3 Partisil ODS-3 11 12.0 mBondpak C-18 10 7.9 Nova-Pak C-18 7 5.5 对色谱柱填料的了解(五) 平均孔径/孔体积 孔径/孔体积分布 大的孔径可分析高分子量的分子 硅胶的孔结构 硅胶的孔结构 对色谱柱填料的了解(六) 硅胶的活性 主要影响碱性化合物的保留行为：k 生产硅胶时处理温度不同，硅胶活性也不同 是选择性差异的主要来源 硅胶的杂质含量 重金属含量低，硅羟基活性小，拖尾减小 是色谱柱质量好坏的重要标志 对色谱柱填料的了解(七) 填料的pH稳定性 硅胶填料 pH：2-8 聚合物填料 pH：2-12 杂化硅胶填料 pH：2-12 pH值小于2时键合相水解 pH值大于8时硅胶溶解 对色谱柱填料的了解(八) 填料的热稳定性 普通硅胶填料 柱温:≤60℃ 聚合物填料(高温GPC) 柱温:≤150℃