基因工程原理与技术07.pdf

专题7 DNA文库的构建 o基因组DNA文库的构建 ocDNA文库的构建 o基因克隆的筛选策略 oDNA文库的保存 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 基因文库 o 基因文库 （也称DNA文库）是指某一生物体全部或部 分基因的集合。 o 某个生物的基因组DNA或cDNA片段与适当的载体在体 外重组后，转化宿主细胞，并通过一定的选择机制筛选 后得到大量的阳性菌落（或噬菌体），所有菌落或噬菌 体的集合即为该生物的基因文库（gene library）。 o 基因文库由外源DNA片段、载体和宿主等3个部分组 成。 o 按照外源DNA片段的来源，可将基因文库分为：基因 组DNA文库（genomic DNA library）和cDNA文库 （complementary DNA library）。 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 7.1 基因组DNA文库的构建 7.1.1 基因组DNA文库的类型 1.质粒文库 o 质粒是最早用于构建基因组文库的载体，现已发展了数 十种适用于基因克隆、表 和测序等不同目的的质粒载 体。 o 质粒载体所容纳的外源DNA片段一般在10 kb以内。 o 这类基因组DNA文库一般应用于 鸟枪法”全 因组测序 研究和用于构建亚克隆文库或亚基因组文库。 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 2.噬菌体文库 o 噬菌体文库是以细菌噬菌体基因组衍生的一系列载体系 统构建的，常用的有噬菌体载体、M13单链噬菌体载 体、P1噬菌体载体及由噬菌体衍生的质粒载体。 o M13载体所容纳的外源片段较小，一般用于构建cDNA 文库或BAC和PAC亚克隆文库。 o 噬菌体文库中应用最广泛的是噬菌体。由于其有利于 利用分子杂交的方法进行筛选，用噬菌体构建的基因 组DNA文库在小基因组物种的基因克隆中起着重要作 用。 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 3.黏粒文库 o 黏粒又称柯斯质粒，是由噬菌体的cos序列、 质粒的复制序列及抗生素抗性 因构建而成的 一类特殊的质粒载体。 o 黏粒载体和噬菌体载体类似，主要用于构建小 基因组物种的基因组DNA文库。 o 利用它们在筛选上的优势来分离单个基因或构 建一定区间范围的亚基因组DNA文库等。 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 4.人工染色体文库 o 包括酵母人工染色体文库、细菌人工染色体文 库和P1人工染色体文库，也称为大片段基因组 DNA文库，容纳的外源DNA片段为100 kb-1 Mb。 o 主要用于大 因组物种的 因克隆、物理图谱 构建和 因组测序等，在 因组研究中应用越 来越广泛。 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建