分枝杆菌属教材幻灯片.pptVIP

分枝杆菌属 是一类细长略带弯曲的杆菌,含有分枝菌酸,有分枝生长的趋势而得名。具有抗酸性,一般不易着色,经加温或延长时间才能着色,着色后能抵抗盐酸酒精的脱色作用,故又称抗酸杆菌,归属于放线菌科,已鉴定的有70余种。 第一节结核分枝杆菌 包括人结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、非洲分枝杆菌和田鼠分枝杆菌等,其中前三者对人类致病。人型结核分枝杆菌感染的发病率最高。 由于AIDS发病率呈上升趋势,而AIDS极易患结核病,因此更使得结核病成为危胁人类健康的一个严重的全球性公共卫生问题。 一、临床意义 (一)致病物质是荚膜、脂质和蛋白质。 1．荚膜有助于粘附,能防止有害物质进入结 核分枝杆菌,还可抑制吞噬体与溶酶体融 合。 2. 蛋白质 有抗原性,和蜡质D结合后能使 机体发生超敏反应,并在形成结核结节中 发挥作用。 3．脂质 毒力与所含的脂质,尤其是糖脂更为重要。 ①索状因子是分枝菌酸和海藻糖结合的一种糖脂,能损伤细胞线粒体和抑制氧化磷酸化过程,抑制粒细胞的游走,引起慢性肉芽肿。 ②磷脂能促进单核细胞增生,使巨噬细胞转变为类上皮细胞,从而形成结节。 ③硫酸脑甘酯是有毒株细胞壁的成分,能抑制溶酶体同吞噬体的结合,使细菌在细胞内长期存活。 ④蜡质D:有佐剂作用,激发机体产生迟发型超敏反应。 (二)所致疾病 通过呼吸道、消化道和损伤的皮肤等多途径感染机体,引起多种脏器的结核病,其中以肺结核为多见。细菌能够在巨噬细胞内繁殖。为细胞内寄生菌。 结核的免疫为有菌免疫或称传染性免疫,指机体对细菌再次入侵有免疫力。细胞免疫在抗感染免疫中起重要作用,产生细胞免疫的同时,也产生迟发型超敏反应。 二、微生物特性 1.为分枝状,略带弯曲的抗酸杆菌,加温苯胺染料染色后不易被3％盐酸酒精脱色,抗酸性染色法染色后结核分枝杆菌呈红色,背景呈蓝色。菌体外有荚膜。 2.菌体含有脂质、多糖和蛋白质等成分。与 致病性免疫性有关。 3.细胞壁骨架、蜡质D和核酸等均有佐剂作用。 4.为专性需氧,3％─5％CO2能促进生长。营养要求较高,必须在含血清、卵黄、甘油以及含某些无机盐类的特殊培养基才能生长良好。最适生长温度为35℃,生长缓慢,14─18h分裂1次, 2─5w才出现肉眼可见的如菜花样粗糙型菌落。 5.抵抗力 对理化因素抵抗力较强。耐干燥,在干燥的痰内生存6～8个月,对化学消毒剂的抵抗力较强,在3％HCl或6％H2SO4中不被杀死,常用于处理有杂菌污染的检材,对湿热敏感,60℃30min可杀死细菌,在70％～75％乙醇中数分钟即被杀死。 5.分离培养 脑脊液、胸腹水等无杂菌污染的标本可直接或离心后取沉渣接种等有杂菌污染的标本在接种到培养基之前须做适当的处理,以消除杂菌的干扰。 标本接种于选择性固体培养基中,常用罗琴培养基,所含的孔雀绿或青霉素可抑制杂菌生长:37℃,5％─10％CO2培养8周,如果出现干燥呈颗粒状、灰白色菌落,涂片染色为抗酸阳性,多数是结核分枝杆菌。阴性继续培养至12周方可报告。 6.鉴定 菌种鉴定可为结核病和非典型分枝杆菌病的临床鉴别和防治提供科学的依据。 (1)PCR反向膜探针杂交EHSA法(PCR杂交梳):该法是将PCR、分子杂交、酶联免疫显色技术有机结合,经过两次特异性双向选择,其特异性相互补充和加强,对提高方法的特异性,消除假阳性起决定作用。 (2)DNA探针:使用对分枝杆菌rRNA序列特异的DNA探针与分枝杆菌rRNA杂交,由于每个分枝杆菌细胞内有10,000个rRNA拷贝,故为杂交提供了放大系统,提高了灵敏度,将荧光素或同位素标记在探针上,可鉴定菌种。 (3)16s rRNA基因序列测定:由于不同种的分枝杆菌其16srRNA基因序列是不同的,所以可通过测定16s rRNA基因序列鉴定菌种。 (4)高效液相色谱(HPLC)检测:由于不同种的分枝杆菌细胞壁中的分枝菌酸不同,所以利用HPLC检测分枝菌酸可鉴定菌种, 7.药物敏感性试验 耐药株的增多,应做药物敏感性试验,以指导临床合理用药。 将纯培养物菌悬液,接种含各种浓度药物的固体培养基上,同时做不含药物的对照组。经过培养,含有药物的培养基上菌落数目是对照组的75％以上,则认为该菌对该药物浓度为完全耐药,如无菌落生长则为敏感。 四、结核菌素试验 (1)原理:旧结核菌素(OT),主要成分是结核分枝杆菌蛋白。将其稀释10000倍,使每0．1ml含1u。纯蛋白衍生物(PPD),是用三氯醋酸沉淀结核菌培养滤液后的纯化物。每O．00002mg为1U,,注入皮内后如受试者已感染结核,则结核菌素与致敏淋巴细胞特异性结合,形成迟发型超敏反应性炎症。 (2)方法:取5UPPD或OT0.1ml注射于前臂掌侧皮下,经48─72h