06实验四 人类X小体、Y小体检测.ppt

实验四  人类X小体、Y小体检测 一、实验目的 掌握X小体、Y小体的玻片标片制作方法。 绘制X小体、Y小体形态特征及所在部位。 鉴定个体的性别，为进一步研究人类染色体畸变与疾病的关系提供基础方法、为遗传病临床诊断提供参考。 二、实验原理 1949年Barr和Bertran在研究猫的间期神经细胞时，发现雌猫体细胞核膜边缘有一个可被碱性染料染色的小体而雄猫没有。后来发现人类正常女性口腔上皮、阴道上皮、皮肤、羊水等的细胞中都有一个这样的小体，继而有人进一步发现所有哺乳动物雌体细胞中都有同样的一个小体。一般认为这种小体是两个X染色体中的一个在间期发生异固缩形成的，故而将其称为X小体，X染色质，又称为Barr小体。Barr小体出现在哺乳动物雌性个体细胞的细胞核膜边缘，这主要是因为这条染色体处在失活状态所致，Morishima等利用放射性标记的方法证实了失活状态的性染色体与其他异染色质（heterochromatin）一样，在DNA复制时总落后于其他常染色质，且大多出现在核膜边缘。性染色质的数目是X染色体数减1。故可以根据X小体的有无、数目来鉴定胎儿的性别和性别畸形。 Y小体是人类男性体细胞中Y染色体长臂末端显现的明亮小体，是由萤光染料染色后显示的萤光所致。因而称为Y小体或Y染色质。亦可根据Y小体的有无、数目鉴定胎儿的性别和性别畸形。 三、实验材料 口腔粘膜（男、女）、发根细胞（女） 1．X小体的观察 取材:受检查者用水漱口数次，尽可能除去细菌和食物残渣；用洁净的牙签从口腔两侧颊部刮取粘膜，第一次刮取物弃去，将第二次、第三次刮取物涂在干净的载玻片上。 固定:滴加固定液（95%乙醇:乙醚=1:1或直接用乙醇）固定20～30min，空气干燥。 染色制片:滴加1～2滴改良品红于室温下染色10～20min（勿使干燥），加上盖片，垫上滤纸用手指轻轻加压即可。 镜检：低倍镜下计数100个核膜完整，细胞不重叠，无核固缩的细胞；并在高倍或油镜下观察。 若使用女性发根细胞，需选用带有毛囊的头发（约2cm长），再加一滴染液后加上盖玻片，洒精灯上微热，静置5min，后盖一滤纸压片。 人口腔X小体 X小体的形状 2. Y小体的观察 取材固定： 染色制片：制好的涂片放入固定液（1份95%乙醇和1份乙醚）固定15～30min；95%乙醇处理20min；0.5%二盐酸喹吖水溶液染色10min，自来水1min，然后加1～2滴MacIlvaine氏缓冲液（pH5.4～8.0），覆以盖片。 荧光显微镜检查：用低倍镜，再用高倍镜或油镜观察。整个细胞发出荧光者不计。 六、实验结果 1.X小体： 油镜下可见X小体为一致密的浓染小体。轮廓清晰，约1um，常附着于核膜边缘或靠边内侧，其形态有三角形、卵形、扁平形等。 正常女性间期细胞核中X小体比例约30%～50%，男性中则偶尔可见（2%），且不典型。 六、实验结果 2．Y小体：荧光显微镜下可见细胞核中有发亮的荧光小体，直径0.3～0.5um，正常情况下Y小体的出现率为25～50%，正常女性无，性异常者，如核型为47，XYY的个体，可见两个Y小体。 七、作业及思考题 1.统计X小体的频率，画2～3个典型细胞，示X小体的形态和所处部位。 2.计算出现Y小体的细胞频率。 3.什么是剂量补偿效应？ 4.Barr小体分析技术在人类遗传学工作中有什么用途？ 5.在制片过程中使用HCl酸解的目的是什么？ 6.为什么Barr小体一般出现在核膜边缘？ * * 四、实验器具和药品 1.器具：普通显微镜、荧光显微镜、恒温水浴锅、载玻片、盖玻片、镊子、牙签、滤纸、纱布等。 2.药品：95%乙醇、乙醚、改良碱性品红、盐酸喹吖、Macllvaine氏缓冲液、石蜡。 五、实验步骤 * *