项目二 链霉素的发酵.pptVIP

链霉素的发酵方案的制备 制作小组：第三组 陈文 顾香君 戴逊 桑圣月 冯伊鹭 陈科亦 一、概 述 链霉素（streptomycin）是一种氨基葡萄糖型抗生素，分子式C21H39N7O12。 1943年美国 S.A.瓦克斯曼从链霉菌中分离得到，是继青霉素后第二个生产并用于临床的抗生素。它的抗结核杆菌的特效作用，开创了结核病治疗的新纪元。从此，结核杆菌肆虐人类生命几千年的历史得以有了遏制的希望。 （一）链霉素及其理化性质 链霉素是氨基糖苷类抗生素。链霉素分子由链霉胍、链霉糖和N-甲基-L葡萄糖胺组成的三糖苷，在1，3-位置上带有2个胍基的l，3-去氧青蟹肌醇，去掉2个脒基后称为链霉胺。链霉糖是带有支链的5’-脱氧五碳糖，在第3碳上有一个醛基。N-甲基-L-葡萄糖胺是在第2碳上的-NH2被甲基化(-CH3NH)的L-葡萄糖胺。这三糖连接的糖苷键都是α型的糖苷键。 结构式ieg 性状： 白色或类白色粉末，无臭或微臭。 溶解情况： 易溶于水，微溶于乙醇，不溶于甲醇、氯仿和丙酮。 作用范围： 硫酸链霉素为一种氨基糖苷类抗生素。链霉素对结核分枝杆菌有强大抗菌作用，其最低抑菌浓度一般为0.5mg/ml。非结核分枝杆菌对该品大多耐药。 实验仪器与材料 培养基 1.斜面高氏一号培养基 可溶性淀粉2% 氯化钠0.05% 硝酸钾0.1% 三水磷酸氢二钾0.05%七水硫酸镁0.05% 七水硫酸亚铁0.001% 琼脂1.5%-2.0% pH：7.4-7.6 2.种子培养基 可溶性淀粉3% 玉米蛋白粉0.5% 碳酸钙2.0% 玉米浆3.5% pH:7.0-7.5 3.发酵培养基 葡萄糖4.0% 玉米淀粉3.5% 玉米浆2.0% 玉米蛋白粉3.0% NH4Cl0.5% NaCl1.5% CaCO31.5% 泡敌0.05% pH7.0-7.2 （二）实验菌种：灰色链霉菌，微生物实验室保藏 （三）仪器：玻璃试管、试管架、吸管（1ml,2ml,10ml）、洗耳球、离心管、容量瓶、烧杯、三角瓶（250ml,500ml）、量筒（250ml,500ml,1000ml）、玻璃棒、试纸、塑料漏斗、电炉、接种铲（针）、振荡培养箱、恒温箱、台秤等 液氮保藏(-196℃) 沙土管保藏(2-4℃) 原斜面孢子 中罐种子 小罐种子 摇瓶种子 斜面孢子(代1) 大罐发酵液 提炼车间 斜面培养恒温恒湿35-36℃，7天 斜面培养恒温恒湿34-35℃，6天 摇瓶培养33-34℃，39.5hr转速250rpm 装量80ml/750ml接种量一块斜面/瓶50-64hr 小罐种子培养36±0.5℃24-30h转速60-300rpm， 搅拌功率5.5kw通气量2m3/min,罐压0.03Mpa 中罐种子培养36±0.5℃，25hr转速60-240rpm接种量15%通气量1.5VVM罐压0.03Mpa搅拌功率22kw 大罐发酵36±0.5℃，136hr转速60-130rpm接种 量15%通气量0.75VVM罐压0.04Mpa搅拌功率115kw 工 艺 流 程 或 一、生产菌种 早期发现产链霉素的生产菌种是灰色链霉菌。 后来又找到了产链霉素的其他类型链霉素族抗生素(如羟基链霉素或双氢链霉素)的菌种。 如比基尼链霉菌、灰肉链霉菌等 。灰色链霉菌的孢子柄直而短，不呈螺旋形。孢子量很多，呈椭圆球形。气生菌丝和孢子都呈白色。单菌落生长丰满，呈梅花形或馒头形，直径约为3～4mm。基内菌丝透明，在斜面背后产生淡棕色色素。 链霉素产生菌诱变育种常用的诱变剂有：紫外线、7射线、氮芥、乙烯亚胺、亚硝酸和硫酸二乙酯等。一些化学诱变剂又经常和紫外线等进行复合处理。近年来采用亚硝基胍、快中子和激光等，诱变选育出营养缺陷型或再回复突变型高产菌株。杂交育种与诱变育种相结合的方法，对提高菌种的生产能力，收到了较好的效果。 (一)斜面孢子培养 将砂土管(或冷冻管)菌种接种到斜面培养基上，经培养后即得原始斜面 斜面培养基的主要成分有葡萄糖、蛋白胨和豌豆浸汁等，其中蛋白胨和豌豆浸汁的质量对斜面孢子质量影响很大。蛋白胨是最关键的原材料，对产孢子数量的影响不容忽视。豌豆的品种和产地以及培养基的pH值(以中性或偏酸性为宜)对产孢子质量亦有影响，需特别注意。 原始斜面的质量要求：菌落分布均匀，密度适中，颜色洁白，单菌落丰满。再由原始斜面的丰满单菌落接种至斜面上，长成后即得生产斜面，斜面上的菌落应为白色丰满的梅花型或馒头型，背面为淡棕色色素，排除各种杂型菌落。经过两次传代，可以达到纯化的目的，排除变异的菌株。生产斜面孢子的质量需要用摇瓶试验进行控制。合格的孢子斜面贮存在冰箱 (0－4℃)内备用。 (二)摇瓶种子培